健脾养正消癥方调控肿瘤相关巨噬细胞极化抑制胃癌上皮间质转化的机制研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:liangjingyu1
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研究目的:观察健脾养正消癥方及拆方对荷胃癌MFC的615小鼠皮下移植瘤内肿瘤相关巨噬细胞(TAM)浸润程度及分化表型的改变,并进一步研究其对TAM表型改变及EMT表型转化的影响及关键分子的变化。研究方法:1.建立荷胃癌MFC的615小鼠模型,将小鼠分为健脾养正消癥方组(全复方组),健脾养正组,消癥散结组,给药15天后,观察全复方及拆方对胃癌皮下移植瘤、肺转移瘤的抑制作用。2.流式细胞仪、免疫组化检测全复方及拆方对小鼠移植瘤TAM数量及表型分化的影响。3. Real-time PCR、免疫组化、Western Blot方法检测全复方及拆方对小鼠移植瘤EMT及PI3K/AKT信号通路关键蛋白的影响。研究结果:1.在皮下移植瘤抑瘤率上,与空白组相比,全复方组及消癥散结组有抑制移植瘤生长的作用(P<0.05)。在肺转移抑制率上,5-Fu组>全复方组>消癥散结组>健脾养正组>空白组。2.流式细胞仪检测表明,与空白组相比,健脾养正组可升高M1型TAM(P<0.05),其余各组亦有升高M1的趋势,但没有统计学差异;与空白组相比,各给药组均可降低M2型TAM的表达(P<0.05)。免疫组化结果表明,在TAM数量(CD68+)上,与空白组相比,全复方组有所降低(P<0.05),健脾养正组、消癥散结组有降低趋势,但无统计学差异。在M2型TAM(CD163+)表达上,与空白组相比,健脾养正组表达降低(P<0.05);其余给药组有降低表达的趋势,无统计学差异。在M2型TAM (CD206+)表达上,与空白组相比,各给药组均表达降低(P<0.05)。3.实时定量PCR、免疫组化、Western Blot实验结果表明,与空白组相比,全复方组及拆方组能上调E-cadherin,下调N-cadheri、twist、Slug、Snail、mmp2、mmp9,全复方组效果优于拆方组。Western Blot实验表明,与空白组相比,全复方组及拆方组能下调P-AKT、P-PI3K、P-MTOR的表达,全复方组下调效果优于拆方组。研究结论:全复方组、消癥散结组能抑制小鼠皮下移植瘤生长和肺转移瘤的发生,全复方组效果优于拆方组。在小鼠移植瘤组织中,全复方组能减少TAM的数量,全复方组效果优于拆方组。健脾养正组能升高M1型TAM的表达,效果优于全复方组。全复方组及拆方组均能减少M2型TAM的表达,健脾养正组效果优于全复方组。全复方组及拆方组均能抑制EMT转化及P13K/AKT信号通路的活化,全复方组效果优于拆方组。实验表明,健脾养正消癥方能通过减少荷胃癌MFC的615小鼠皮下移植瘤内TAM的数量及M2表型,减少瘤体内EMT转化,其机制可能与P13K/AKT通路相关,最终抑制小鼠移植瘤的生长、转移。
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