【摘 要】
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目的:心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）其可诱导心肌细胞死亡和加重心肌缺血性损伤,加重心脏疾病并严重影响心脏手术的预后,危及人们的生命安全。越来越多的研究表明,micro RNA（miR）在心肌I/R损伤的发展中至关重要。本研究通过使用大鼠心肌细胞,采用氧和葡萄糖剥夺再灌注处理建立体外的心肌缺血再灌注损伤模型,探讨miR-503及PDCD4在心肌细胞中缺血再灌注时的作用,并为减轻或者治疗心肌缺血再灌
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目的:心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）其可诱导心肌细胞死亡和加重心肌缺血性损伤,加重心脏疾病并严重影响心脏手术的预后,危及人们的生命安全。越来越多的研究表明,micro RNA（miR）在心肌I/R损伤的发展中至关重要。本研究通过使用大鼠心肌细胞,采用氧和葡萄糖剥夺再灌注处理建立体外的心肌缺血再灌注损伤模型,探讨miR-503及PDCD4在心肌细胞中缺血再灌注时的作用,并为减轻或者治疗心肌缺血再灌注损伤提供理论依据和策略。方法:（1）细胞模型:将H9C2细胞置于缺氧和葡萄糖剥夺状态下,然后再灌注处理,建立心肌细胞的I/R的体外模型。采用无葡萄糖的缺氧培养基培养H9C2细胞,于37℃含95%N2和5%CO2的厌氧室中培养4小时。之后把细胞放入含葡萄糖（4.5mg/m L）的培养基中,在培养箱（95%空气和5%CO2）中培养24小时。（2）将心肌细胞培养后分别处理,总共分为对照组,I/R组,I/R+miR-503inhibitor组,I/R+miR-503 mimic组。（3）通过qRT-PCR检测各组心肌细胞miR-503以及PDCD4的mRNA水平。（4）通过使用Western blot检测各组心肌细胞的PDCD4的表达水平。（5）采用流式细胞术,检测各组细胞中的细胞凋亡情况。（6）双荧光素酶报告分析:构建PDCD4基因野生型3’UTR以及突变型3’UTR双荧光素酶报告质粒。将他们分别与miR-503空白载体和miR-503模拟物共转染至H9c2细胞中,并检测和分析细胞中荧光素酶活性。结果:（1）经I/R处理后,与对照组相比,心肌细胞中miR-503表达下调,PDCD4表达增加。（2）MiR-503mRNA表达的增加会使PDCD4的表达水平下调,细胞凋亡减少。而miR-503mRNA表达降低,则使PDCD4的表达上调,细胞凋亡增加。（3）双荧光素酶活性报告分析提示miR-503可直接靶向PDCD4。结论:（1）在心肌I/R的体外模型中,miR-503的表达下降,PDCD4的表达水平上升。（2）MiR-503在I/RI中起着保护作用,其可通过靶向PDCD4,抑制PDCD4的表达,参与调控MI/RI的细胞凋亡过程,减轻心肌细胞的缺血再灌注损伤。
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