论文部分内容阅读
目的:研究RNAi技术敲低结肠癌SW620细胞c-Met基因后对放化疗敏感性的影响,c-Met很有可能成为结直肠癌治疗的新生物靶点,针对c-Met的靶向治疗联合传统放、化疗对结直肠癌的治疗带来益处。
方法:运用慢病毒介导的RNAi干扰技术得到稳定的可调控的针对c-Met基因表达的pSD400-c-Met-shRNA-SW620细胞株以及非针对c-Met基因表达的pSD400-scramble-shRNA-SW620细胞株和未行干扰技术的SW620细胞株,利用多西环素(DOX)对不同稳定细胞株细胞进行诱导,使得经过慢病毒介导的细胞35系中发生RNAi干扰,使pSD400-c-Met-shRNA-SW620细胞系中适当表达针对c-Met基因的shRNA,从而适当敲除c-Met基因,使其表达下调,进而分别检测三组稳定细胞系中肿瘤细胞对不同化疗药物(5-Fu、顺铂)的敏感性及对不同放疗剂量(0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)的敏感性的影响。
结果:
1、人结肠癌细胞株SW620细胞为高分化上皮细胞,在10％完全培养基的环境中2-3d可铺满培养瓶;pSD400-c-Met-shRNA-SW620细胞株在不含DOX的情况下可正常生长,细胞呈梭状或多边形,细胞间连接紧密。
2、在DOX诱导下shRNA干扰pSD400-c-Met-shRNA-SW620细胞系细胞c-Met基因表达,不同DOX浓度可见不同程度c-Met基因表达缺失。
3、pSD400-c-Met-shRNA-SW620细胞在不同5-Fu浓度,经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用有明显差异(t0ug/ml=2.009,P=0.072、t1.25ug/ml=2.302,P=0.04、t5 ug/ml=2.687,P=0.023、t20ug/ml=2.569,P=0.028、t80ug/ml=0.321,P=0.755)。
pSD400-scramble-shRNA-SW620细胞株和SW620细胞株在不同5-Fu浓度,经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用无明显差(P＞0.05)。
4、pSD400-c-Met-shRNA-SW620细胞在不同顺铂浓度,经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用有明显差异(t0ug/ml=0.604,P=0.559、t1ug/ml=4.491,P=0.001、t2 ug/ml=3.338,P=0.008、t8ug/ml=2.338,P=0.042、t32ug/ml=3.262,P=0.009)。
pSD400-scramble-shRNASW620细胞株和SW620细胞株在不同顺铂浓度,经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用无明显差(P＞0.05)。
5、pSD400-c-Met-shRNA-SW620细胞在不同照射剂量,经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用有明显差异(t0Gy=1.797,P=0.103、t2Gy=3.706,P=0.004、t4Gy=4.916,P=0.001、t6Gy=3.821,P=0.003、t8Gy=2.234,P=0.049)。
pSD400-scramble-shRNA-SW620细胞株和SW620细胞株在不同照射剂量,经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用无明显差(P＞0.05)。
结论:
本实验研究利用慢病毒介导的RNAi干扰技术处理人结肠癌细胞株SW620后得到稳定的可调控表达针对c-Met的pSD400-c-Met-shRNA-SW620和pSD400-scramble-shRNA-SW620细胞株,通过DOX诱导作用产生shRNA使得pSD400-c-Met-shRNA-SW620细胞发生针对性发生c-Met基因沉默从而对不同浓度化疗药物(5-Fu、顺铂)及不同照射剂量(0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)的敏感性明显增强。
1、不同浓度的化疗药物(5-Fu、顺铂)对pSD400-c-Met-shRNA-SW620、pSD400-scramble-shRNA-SW620和SW620细胞的敏感性明显不同,DOX诱导下发生c-Met基因沉默的pSD400-c-Met-shRNA-SW620细胞对不同浓度的化疗药物(5-Fu、顺铂)的敏感性最强。
2、不同照射剂量(0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)对pSD400-c-Met-shRNA-SW620、pSD400-scramble-shRNA-SW620和SW620细胞的敏感性明显不同,DOX诱导下发生c-Met基因沉默的pSD400-c-Met-shRNA-SW620细胞对不同照射剂量的敏感性最强。