【摘 要】
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猪链球菌（Streptococcus suis,SS）属于重要的人畜共患病原菌。它能够引起宿主的败血症、脑膜炎和心内膜炎等症状,不仅给养猪业带来重大经济损失,也严重威胁人类健康。依据多糖的抗原性不同,SS被分为33种血清型,其中猪链球菌2型被公认为是世界上分布最广泛以及毒力较强的血清型。SS的主要毒力因子包括荚膜多糖（CPS）、溶血素（SLY）、细胞外因子（EF）、溶菌酶释放蛋白（MRP）等。一些
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划（973计划,项目编号2012CB518800）
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猪链球菌（Streptococcus suis,SS）属于重要的人畜共患病原菌。它能够引起宿主的败血症、脑膜炎和心内膜炎等症状,不仅给养猪业带来重大经济损失,也严重威胁人类健康。依据多糖的抗原性不同,SS被分为33种血清型,其中猪链球菌2型被公认为是世界上分布最广泛以及毒力较强的血清型。SS的主要毒力因子包括荚膜多糖（CPS）、溶血素（SLY）、细胞外因子（EF）、溶菌酶释放蛋白（MRP）等。一些适应宿主体内环境的相关因子也参与SS的定植和感染,在血液中存活并引发败血症是SS致病的重要机制之一。本研究构建了SS的转座子突变体库,用高通量的方法筛选了病原菌在宿主血液中存活相关的SS基因,取得主要研究结果如下:1.猪链球菌突变体库的构建用含有Tn917转座子的p TV408温敏型穿梭质粒构建了含有1918个突变体的SS转座子突变体库,完成了整个突变体库的测序和插入基因的COG功能分类,发现该突变体库中包含393个不同基因的突变体,分布相对随机,可以用于后续的功能基因组研究。2.全血杀伤实验筛选猪链球菌血液存活相关基因通过在96孔板上建立高通量全血杀伤实验方法,用猪的全血对突变体中的1918个突变体进行了筛选,计算了每个突变体的杀伤率,通过与亲本菌株比较分析,获得了1151个在血液中存活能力有变化的突变体,其中在血液中存活能力增强的突变体377个,在血液中存活能力下降的突变体774个。对这些突变体中突变的基因进行了功能分析和分类,发现有149个基因在整个细菌中有其在血液存活或毒力基因方面的报道,且主要与碳水化合物代谢、转录因子、转运子和酶等等功能相关,此外还有244个基因在整个细菌中尚未有报到过与血液存活或毒力基因相关的研究。3.猪链球菌血液存活相关基因的验证从筛选到的血液存活相关基因中选取了四个未报道的基因,做了进一步的重复验证和分析,结果证明No.314（Locus＿tag:SSUSC84＿0942）和No.1760（Locus＿tag:SSUSC84＿0561）两个突变体的血液存活能力相对野生株下降,这两个突变体的突变基因编码产物是6-磷酸-半乳糖异构酶亚基和氨基己糖苷。No.27（Locus＿tag:SSUSC84＿1385）和No.1688（Locus＿tag:SSUSC84＿0966）血液存活能力增强,它们突变的基因编码产物分别是5’核苷酸酶和金属磷酸酶的双功能酶和谷氨酰胺转移酶。
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