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本研究以血凝素蛋白（hemagglutinin,HA）为研究对象,选取H7亚型流感病毒HA并筛选其关键的糖基化位点,以糖基化修饰为依据进一步研究内质网分子伴侣CNX、CRT、erp57对H7亚型流感病毒HA表达的影响。为流感病毒HA与内质网分子伴侣机制的研究提供理论基础:（1）通过对H7HA糖基化位点的预测确定5个糖基化位点,分为N端的3个糖基化位点和C端的2个糖基化位点,分别对N端和C端的糖基化位点进行组合突变,通过PCR扩增的方法构建单点、两点及三点的糖基化位点突变的融合表达质粒。（2）通过Western blot检测N端及C端糖基化位点突变质粒在野生型293T细胞内的表达。（3）HA为糖基化修饰蛋白,其需要在内质网内相关分子伴侣的辅助下方能达到功能性成熟的状态。通过Western blot和流式细胞技术检测H7HA在以CRISPR/Cas9技术构建的CNX、CRT单基因及双基因敲除的293T细胞中的蛋白表达。（4）为进一步研究内质网分子伴侣CRT与H7HA之间的关系,通过免疫共沉淀方法和Western blot检测内源性CRT与H7HA的相互作用。（5）为进一步证明CRT与H7HA存在相互作用,在CNX、CRT基因双敲除的细胞中转入外源性的CRT,通过免疫共沉淀方法和Western blot检测外源性CRT与H7HA的相互作用。（6）为建立erp57基因敲除的人肺腺癌细胞A549细胞系,本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了erp57基因的向导RNA（g RNA）敲除质粒,并将p Cas9-EGFP和erp57 g RNA质粒共同转染至A549中,采用流式分选及限制性稀释的方法筛选单克隆细胞株,通过基因组测序及Western blot检测,筛选erp57基因敲除的A549细胞系。（7）为进一步研究ERp57对流感病毒的影响,将野生型及erp57基因敲除细胞系同时感染H1N1亚型流感病毒以测定erp57基因敲除对流感病毒复制水平的影响。结果 （1）成功构建了N端和C端的糖基化位点单点、两点及三点的糖基化位点突变的融合表达质粒。（2）3号糖基化位点突变的HA0蛋白表达降低,C端糖基化位点突变质粒检测不到HA0和HA2的蛋白表达。（3）H7HA在CNX、CRT双敲除的细胞中的蛋白表达显著降低。（4）H7HA可以将细胞内的CRT拉出,且N端糖基化位点并不影响HA与CRT的相互作用。（5）H7HA可以将外源性的CRT拉出,表明CRT与H7HA存在相互作用,且N端糖基化位点并不影响HA与CRT的相互作用。（6）筛选获得erp57基因敲除的A549细胞系。erp57基因敲除细胞系与野生型细胞生长动力学无显著差异。（7）流感病毒在erp57基因敲除细胞中的复制显著地受到了抑制,表明ERp57是流感病毒复制过程中的一个关键蛋白。结论 H7HA N端的糖基化位点中3号糖基化位点可以影响HA0的表达,C端糖基化位点突变后检测不到HA0及HA2的表达,CNX、CRT可以影响H7HA蛋白表达,而且CRT与H7HA存在相互作用;流感病毒在erp57基因敲除细胞中的复制显著地受到了抑制。本研究为开发新的抗流感病毒手段提供了有益信息。