目的：建立人大肠癌LOVO细胞多药耐药细胞株LOVO/5-FU，并探讨其生物学特性及耐药机理。 方法：人大肠癌细胞系LOVO在体外与2.5ug/m15-氟尿嘧啶（5-FU）作用，诱导成功LOVO/5-FU耐药细胞株，体外细胞毒性实验观察它们对5-FU、MMC、ADM、DDP、MTX、Arac等六种药物敏感性。用噻唑蓝（MTT）法、光镜及电镜观察两种细胞的形态及结构差异，绘制两种细胞的体外生长曲线。电镜、DNA凝胶电泳和原位DNA末端转移酶标记法，分别检测耐药细胞株LOVO/5-FU及敏感细胞株LOVO对5-FU诱导细胞凋亡的情况。采用免疫组化LSAB法检测两种细胞对P26-Bcl-2表达。 结果： 一．LOVO细胞系经5-FU周期性作用诱导培养6月，获得了多药耐药细胞系并命名为LOVO/5-FU，该细胞系对5-FU的耐药指数为16.48，对MMC、DDP和ADM有交叉耐药性，但对MTX、Arac仍保持与LOVO细胞几乎相同的敏感性。在脱离5-FU体外冻存10月，其耐药性可保持60％。 二．LOVO/5-FU细胞株对5FU、MMC、ADM、DDP均有耐药性。此细胞株对5-FU的耐药程度较亲本细胞提高，与亲本细胞相比，耐药细胞株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异型性明显；LOVO/5-FU细胞胞体体积变大，贴壁生长时形态拉长，贴壁牢，细胞之间易聚集成团，细胞表面有微绒毛。但其体外群体生长时间与亲代细胞的差异不显著。 三．免疫组化LSAB法证明，两种细胞均表达P26-Bcl-2，光镜下，LOVO和LOVO/5-FU细胞胞浆可见深浅不一的棕黄色物质，LOVO/5-FU细胞较LOVO细胞明显深染，用图象分析仪分别定量测定两种细胞中的棕黄色物质的光密度值，经两样本均数比较的t检验，P＜0.01，按a=0.05标准，说明LOVO/5-FU细胞P26-Bcl-2的表达高于LOVO细胞。LOVO/5-FU细胞可以抵抗5-FU诱导的细胞凋亡，其凋亡机理与P26-Bcl-2过度表达有关。 四．5-FU2.5ug/ml作用LOVO细胞48h和5-FU5ug/ml作用LOVO/5-FU 细胞48h。均产生细胞皱缩，染色质浓缩，核碎裂；透射电镜显示： 2．sug／m15－FU作用LOVO 细胞48h臣出现凋亡刁体和25gg／m15－FU作用 LOVO／5－FU 48h出现核固缩；SFU 2．sus砌 作用 LOVO 细胞 48h、72h和 LOVO／5－FU细胞 72h以及 2．sug／ml、sus／ml、7．sug／ml作用 LOVO 48h 和sug／ml、7．sug／ml作用LOVO／5－FU 48h细胞mA凝胶电泳出现梯形 （ladder）凋亡带，5－FU 2．sug／ml作用 6h、12h、18h、24h，LOVO细 胞原位加A末端转移酶标记阳性率高于LOVO乃干U细胞。 结论： 一．本研究成功的建立L0V0／5干U多药耐药细胞株，其耐药性稳定，是 研究大肠癌MOR的理想模型： 二．恒定药物浓度周期作用方式是体外诱导大肠癌耐药细胞系更好的方 式； 三．LOVO乃干U细胞生物学性状改变可能与其多药耐药性紧密联系在 一起： 四．5干U诱导人大肠癌LOVO和LOVO历－FU细胞凋亡，具有明显的时 间和剂量效应； 五．在相同条件下，耐药细胞株LOVO／5－FU和敏感细胞株LOVO寸比， LOVO／5－FU细胞凋亡受到抑制，它可能是大肠癌LOVO 细胞灿R发生 机制之一，研究细胞凋亡机理对克服化疗产生的多药耐药及逆转多 药耐药具有重要的临床价值； 六．L0V0／5干 细胞可抵抗5斗U诱导的细胞凋亡，其抗凋亡的机理可 言与P26－BC12过度表达密切相关，P26－B。l－2过度表达可能是大 肠癌MDR重要机制之一。