【摘 要】
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目的探讨针对环氧化酶-2(COX-2)的RNA干扰(RNAi)对兔角膜基质细胞中COX-2及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法体外培养兔角膜基质细胞，测定阳离子脂质体HiperFect Tran
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目的探讨针对环氧化酶-2(COX-2)的RNA干扰(RNAi)对兔角膜基质细胞中COX-2及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法体外培养兔角膜基质细胞，测定阳离子脂质体HiperFect Transfection Reagent介导的siRNA在兔角膜基质细胞中的转染率，优化转染条件。设计并合成3条针对兔COX-2基因的短发卡RNA(shRNA-1，2，3)和一条阴性对照shRNA。利用24孔板接种兔角膜基质细胞，随机分为A、B、C、D、E、F六组，每组各10个孔，每个孔中接种细胞数目约为6×10~4。A组为空白对照组，B、C、D、E、F为实验组，其中B组接种细胞后36小时每ml培养液加入25ng IL-1α，C、D、E、F组接种细胞后24小时每个细胞孔(含0.5ml无血清DMEM培养液)内加入3.0μl HiPerFect Transfection Reagent和25nM不同shRNA(分别为shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3及阴性对照shRNA)的稀释混合物，12小时后每ml培养液再加入25ng IL-1α。在IL-1α处理6h、12h、24h、48h、72h时随机选取每组中两个培养孔的细胞，提取RNA，实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)检测兔角膜基质细胞中COX-2和MMP-2基因的表达，并与对照组进行比较。结果HiperFect Transfection Reagent能够有效介导siRNA转染体外培养的兔角膜基质细胞，转染率可达70-80％。IL-1α刺激后兔角膜基质细胞中COX-2及MMP-2mRNA的表达较空白对照组显著升高，并呈现时间依赖性；在不同的时间点，生物合成的三条针对COX-2的靶向shRNA中shRNA-2能显著抑制IL-1α刺激后的兔角膜基质细胞中COX-2、MMP-2 mRNA表达，抑制率最高可分别达83.04％、73.69％，与单纯IL-1α刺激组相比差异均有高度统计学意义(P＜0.01)；而shRNA-1、shRNA-3转染组与单纯IL-1α刺激组相比差异无统计学意义(P＞0.05)；阴性对照shRNA组COX-2、MMP-2 mRNA的表达与单纯IL-1α刺激组相比差异也无统计学意义(P＞0.05)。结论针对COX-2的RNAi能够有效抑制IL-1α诱导后的兔角膜基质细胞中COX-2及MMP-2的表达。
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