欧洲鳗鲡胸鳍细胞优化培养条件及促长因子研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:canble_dut
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欧洲鳗鲡是我国主要的鳗鲡养殖品种。随着人工养殖的兴起,欧洲鳗鲡的病害也呈现出蔓延的趋势,发病率和病死率逐年上升,成为制约欧洲鳗鲡养殖业发展的重要因素之一。危害欧洲鳗鲡的病原种类繁多,病害防治技术滞后,尤其是病毒性疾病,人们对鳗鲡病毒性疾病的了解还处于比较粗浅的水平。影响鳗鲡病毒性疾病得以深入研究主要原因是缺乏适合的细胞模型。迄今为止,国内尚未见到欧洲鳗鲡细胞系的研究报道。为了建立一种欧洲鳗鲡病毒性疾病分离、鉴定的细胞模型,深入调查鳗鲡病毒性疾病流行与传播的情况,本实验以欧洲鳗鲡胸鳍细胞人工培养适应株(第21代)为实验材料,采用人工培养基体外传代培养的方法,探讨欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞体外培养的最适条件;并在最适培养基的基础上通过添加碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)等可能的传代细胞促长因子,分析其对欧洲鳗鲡胸鳍细胞生长速率的影响。通过观察比较不同培养基(L-15、RPMI-1640、高糖型DMEM)、血清(BS和FBS)和血清浓度(5%、10%、15%、20%)培养条件下欧洲胸鳍细胞的生长状况,并在限定的时间内收集细胞、进行细胞计数、绘制胸鳍细胞的生长曲线,分析不同培养基和血清成分及浓度对欧洲鳗鲡胸鳍细胞生长状态的影响。培养基优化研究结果表明: L-15培养基最适合欧洲鳗鲡胸鳍细胞的生长,RPMI-1640次之,高糖型DMEM的效果最差;FBS(胎牛血清)优于BS(小牛血清),其中10%FBS添加量最佳。bFGF和IGF1添加试验结果提示:在10%FBS L-15全价培养基的条件下,bFGF对欧洲胸鳍细胞的生长有明显的促进作用,最佳效应浓度为10ug/L; IGF-1(5ug/L-50ug/L)不利于欧洲鳗鲡胸鳍细胞的生长。上述研究在供试的三种培养基、二种血清和二种可能的细胞促长因子中,筛选出欧洲胸鳍细胞最适全价培养基配方,同时初步证实bFGF对欧洲胸鳍细胞有促长作用,而添加IGF-1则不利于欧洲胸鳍细胞的生长。研究结果为缩短欧洲鳗鲡胸鳍细胞的倍增时间,提高在限定培养周期内胸鳍细胞的生物量提供了一种实用、有效的配方与培养方法,这种方法在鳗鲡病毒性病原分离、鉴定及疫苗制备方面具有潜在应用价值。
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