根尖牙乳头干细胞对CD4+T细胞增殖、凋亡及向Treg转化的影响

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目的:  根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)是从年轻恒牙根尖牙乳头这一发育中的组织内分离的一种间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)。SCAP具有自我更新和多向分化潜能,是口腔颌面部组织再生的重要干细胞来源。除了组织再生潜能外,SCAP还具有低免疫原性和免疫调节性能。  本研究构建SCAP与CD4+T细胞体外共培养体系,检测SCAP对CD4+T细胞的增殖,凋亡的影响。检测两者共培养后调节性T细胞(regulatoryT cell,Treg)比例的改变及细胞因子分泌情况,进一步研究SCAP的免疫调节性能及其可能机制,为以SCAP为基础的组织再生,炎症性疾病和自身免疫疾病的治疗奠定实验基础。  研究方法:  酶消化法原代分离培养人SCAP,流式细胞术检测其表面标记物CD31,CD34,CD73,CD90,CD105,CD146的表达,茜素红S、油红O染色检测其多向分化潜能。免疫磁珠分离小鼠脾脏CD4+CD25-T细胞。细胞共培养实验分为三组,即SCAP与CD4+T细胞直接接触共培养组,transwell共培养组和对照组(单独培养的CD4+T细胞)。直接接触共培养组即将SCAP与CD4+T细胞通过直接接触方式直接混合培养,transwell共培养组即将CD4+T细胞置于transwell小室内与SCAP共培养,两实验组SCAP与CD4+T细胞按1∶5比例体外共培养72h,分别进行淋巴细胞的CFSE染色,7-ADD/PE-AnnexinⅤ染色,PerCP,APC,PE荧光标记的CD4/CD25/Foxp3染色,应用流式细胞术检测淋巴细胞的增殖情况,凋亡情况以及Treg所占比例,应用ELISA检测共培养上清液中自介素-10(interleukin10,IL-10)的量,实验结果分别以(x)±s表示,采用SPSS17.0软件进行统计学分析,细胞直接接触共培养组、transwell共培养组与对照组之间的两两比较采用方差分析(LSD-t检验),P<0.05为差异具有统计学意义。  结果:  在SCAP和CD4+T细胞共培养体系中,细胞直接接触共培养组较transwell共培养组和对照组的CD4+T细胞增殖率显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05),transwell共培养组CD4+T细胞增殖率,凋亡率与对照组相比无统计学差异(P>0.05); transwell共培养组Treg百分比、IL-10表达水平较细胞直接接触共培养组和对照组显著升高(P<0.05),细胞直接接触共培养组Treg百分比、IL-10表达水平与对照组无统计学差异(P>0.05)。  结论:  人根尖牙乳头干细胞具有免疫调节性能,可能主要通过细胞间直接接触作用抑制CD4+T细胞的增殖,诱导其凋亡;通过非直接接触作用诱导CD4+T绌胞向Treg转化,促进抗炎症细胞因子IL-10的分泌。
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