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静注入免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVlg)是从上千个健康献血者血浆中分离提取的免疫球蛋白混合物,包含约107种广谱抗体。IVIg最初主要用于治疗先天性免疫缺陷疾病,近三十年其在自身免疫性疾病和炎症疾病的治疗中的发挥着越来越重要的抗炎活性。近年来有一些研究认为其发挥抗炎活性的关键与其抗体可结晶段(Fragment crystallizable,Fc)糖链的唾液酸化程度密切相关,高唾液酸化的IVIg及其Fc片段在小鼠关节炎模型及免疫性血小板减少性紫癜等模型中表现出较高的抗炎活性;目前关于此方面的研究还存在争议,而国内尚无关于IVIg唾液酸化及其抗炎活性机制的研究报道。 目的:明确国内主要血液制品厂家IVIg的唾液酸含量;制备高唾液酸化的Fc片段及高唾液酸化的IVIg;验证IVIg及Fc片段的抗炎活性是否与其唾液酸化程度有关。 方法:1.分别建立分光光度法及高效液相-荧光检测法两种适合IVIg产品唾液酸含量测定的方法,比较国内厂家的IVIg唾液酸含量的差异。 2.通过木瓜蛋白酶酶切IVIg,蛋白G柱、分子筛柱两步柱纯化,获取Fc片段;利用西洋接骨木凝集素,富集唾液酸含量较高的IVIg和Fc片段;通过蛋白电泳及免疫印迹分析制备产物的纯度和抗体结构。 3.建立THP-1细胞炎症模型,验证上述制备的高唾液酸化的IVIg和高唾液酸化的Fc组分的抑制炎症因子分泌的能力,比较其抗炎活性与唾液酸化程度的关系。 结果:1.建立的两种唾液酸含量的测定方法均可以应用于与本试验对IVIg及Fc片段的测定;两种方法各有不同优劣之处;国内厂家的IVIg制品唾液酸糖基含量范围在2.75-4.52μg/mg IgG,约合每分子IgG含有1.42-2.34个唾液酸糖基,部分厂家之间存在显著性差异。 2.蛋白电泳及免疫印迹分析显示,通过多步骤纯化制备的高唾液酸化的Fc片段具有良好的纯度和抗体活性。 3.在诱导的THP-1细胞炎症模型中,1mg/mL培养终浓度的IVIg具有良好的抑制两种炎症因子TNF-α、IL-6分泌的能力;高唾液酸化的IVIg及Fc片段相比于同浓度未富集唾液酸的IVIg和Fc片段显示高出2-5倍不等的抑制炎症因子分泌的能力; 结论:国内主要厂家IVIg制品唾液酸含量在2.75-4.52μg/mg IgG之间,部分厂家的制品唾液酸含量存在显著性差异。IVIg在THP-1细胞诱导的炎症模型中具有较好的抗炎活性,高唾液酸化的IVIg和Fc片段具有更强的抗炎活性,并且其抗炎活性与其Fc片段的唾液酸化程度有关。