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背景和目的
5羟色胺（5-HT）作为重要的神经递质，在生物体内参与行为和认知多个方面的功能调控。抑郁障碍的发生和发展和5-HT的失衡有密切联系。5羟色胺转运体（5-HTT；SERT）在调节细胞内外5-HT含量上起到关键性作用。以阻滞SERT为主要药理作用的选择性5羟色胺再摄取抑制剂（SSRIs）已成为目前治疗抑郁障碍的一线药物。随着SSRI类药物的广泛使用，其副作用逐渐为人所知晓。其中SSRIs相关异常出血事件引起了我们的关注。然而，对于SSRIs诱发出血背后的机制尚无定论。既往的研究大多为体外试验，且多关注于ADP途径或胶原途径诱导血小板反应的方面。而凝血酶作为最强的激活剂，其激活途径尚未得到足够的证据证实。本研究将焦点放在凝血酶诱导下的血小板反应，为探讨SSRIs引起出血风险增加的潜在机制提供线索和思路，同时为应对SSRIs相关出血事件提供可能的方向。
材料和方法
8周龄雄性ICR小鼠（n=48）随机分为四组，每天以灌胃方式（i.g.）给予氟西汀4mg/kg（n=12）、8mg/kg（n=12）和16mg/kg（n=12），对照组小鼠给予生理盐水（n=12）。经过连续两周给药处理后，每组内一半小鼠经ELISA检测血小板5羟色胺水平，以尾尖环切法观察记录小鼠尾部出血时间，采集全血使用流式细胞术检测小鼠血小板α颗粒释放功能和糖蛋白IIb-IIIa（GPIIb-IIIa）以反映血小板活化功能，同时检测血小板表面糖蛋白Ibα（GPIbα）表达变化情况，使用血小板聚集仪进行血小板聚集试验以检测血小板聚集功能。随后剩余小鼠停药正常饮食继续饲养两周，再次进行相关指标检测。数据结果采用单因素方差分析，独立样本t检验以及皮尔森相关性分析，双侧P<0.05视为差异有统计学意义。
结果
1．连续给予氟西汀两周后，三个剂量的氟西汀组小鼠血小板5羟色胺水平均显著下降，和正常对照组比较，差异有统计学意义。
2．持续性给予8mg/kg氟西汀和16mg/kg氟西汀两周后，小鼠出血时间延长，与4mg/kg氟西汀组和对照组比较，差异有统计学意义。16mg/kg氟西汀组出血时间长于8mg/kg氟西汀组，差异有统计学意义。
3．8mg/kg氟西汀和16mg/kg氟西汀连续处理两周后，凝血酶诱导的小鼠血小板聚集率下降，与4mg/kg氟西汀组和对照组比较，差异均有统计学意义。16mg/kg氟西汀组血小板聚集率低于8mg/kg氟西汀组，差异有统计学意义。
4．小鼠在连续服用8mg/kg氟西汀和16mg/kg氟西汀两周后，凝血酶诱导下的血小板P选择素表达和活化态GPIIb-IIIa表达下降，与4mg/kg氟西汀组和正常组比较均差异有统计学意义。但静息态GPIIb-IIIa总表达量，各组间比较差异无统计学意义。
5．8mg/kg氟西汀和16mg/kg氟西汀连续服用两周后，小鼠血小板表面GPIbα表达显著性下降，与4mg/kg氟西汀组和对照组比较，差异均有统计学意义。16mg/kg氟西汀组血小板表面GPIbα表达少于8mg/kg氟西汀组，差异有统计学意义。
6．相关性分析发现氟西汀连续服用两周后，小鼠出血时间和5羟色胺水平、血小板颗粒释放、GPIbα表达、GPIIb-IIIa活化和血小板聚集功能存在相关性。
7．氟西汀处理组停用氟西汀两周后，小鼠血小板5羟色胺水平，出血时间，血小板对凝血酶诱导活化和聚集反应的检测结果与正常对照组比较差异无统计学意义。
8．4mg/kg氟西汀组小鼠出血时间，凝血酶诱导血小板反应和血小板表面GPIbα表达情况在给药后和停药后均与正常对照组比较差异无统计学意义。
结论
SSRI类药物氟西汀的持续使用使血小板5羟色胺水平下降。氟西汀影响血小板的止血功能和血小板聚集功能，诱发出血倾向。氟西汀对凝血酶诱导下的血小板颗粒释放作用和GPIIb-IIIa活化产生抑制效应。而这类SSRIs相关的血小板功能改变可能和凝血酶受体GPIbα表达下调有关。由于GPIbα参与血小板粘附作用，因此亦提示氟西汀可能影响血小板粘附功能。凝血酶诱导的血小板聚集、GPIIb-IIIa活化受抑制和出血时间延长相关性最高，提示凝血酶诱导血小板聚集相关功能可能在SSRIs致出血倾向中起主要作用。但这一系列的抗血小板作用是可逆的，提示血小板功能在停药后可自行恢复。本研究给我们对于SSRIs相关异常出血背后的潜在机制提供更全面的理解和新的探讨思路，并且为应对SSRIs所致出血问题提供可能的方向或策略。
5羟色胺（5-HT）作为重要的神经递质，在生物体内参与行为和认知多个方面的功能调控。抑郁障碍的发生和发展和5-HT的失衡有密切联系。5羟色胺转运体（5-HTT；SERT）在调节细胞内外5-HT含量上起到关键性作用。以阻滞SERT为主要药理作用的选择性5羟色胺再摄取抑制剂（SSRIs）已成为目前治疗抑郁障碍的一线药物。随着SSRI类药物的广泛使用，其副作用逐渐为人所知晓。其中SSRIs相关异常出血事件引起了我们的关注。然而，对于SSRIs诱发出血背后的机制尚无定论。既往的研究大多为体外试验，且多关注于ADP途径或胶原途径诱导血小板反应的方面。而凝血酶作为最强的激活剂，其激活途径尚未得到足够的证据证实。本研究将焦点放在凝血酶诱导下的血小板反应，为探讨SSRIs引起出血风险增加的潜在机制提供线索和思路，同时为应对SSRIs相关出血事件提供可能的方向。
材料和方法
8周龄雄性ICR小鼠（n=48）随机分为四组，每天以灌胃方式（i.g.）给予氟西汀4mg/kg（n=12）、8mg/kg（n=12）和16mg/kg（n=12），对照组小鼠给予生理盐水（n=12）。经过连续两周给药处理后，每组内一半小鼠经ELISA检测血小板5羟色胺水平，以尾尖环切法观察记录小鼠尾部出血时间，采集全血使用流式细胞术检测小鼠血小板α颗粒释放功能和糖蛋白IIb-IIIa（GPIIb-IIIa）以反映血小板活化功能，同时检测血小板表面糖蛋白Ibα（GPIbα）表达变化情况，使用血小板聚集仪进行血小板聚集试验以检测血小板聚集功能。随后剩余小鼠停药正常饮食继续饲养两周，再次进行相关指标检测。数据结果采用单因素方差分析，独立样本t检验以及皮尔森相关性分析，双侧P<0.05视为差异有统计学意义。
结果
1．连续给予氟西汀两周后，三个剂量的氟西汀组小鼠血小板5羟色胺水平均显著下降，和正常对照组比较，差异有统计学意义。
2．持续性给予8mg/kg氟西汀和16mg/kg氟西汀两周后，小鼠出血时间延长，与4mg/kg氟西汀组和对照组比较，差异有统计学意义。16mg/kg氟西汀组出血时间长于8mg/kg氟西汀组，差异有统计学意义。
3．8mg/kg氟西汀和16mg/kg氟西汀连续处理两周后，凝血酶诱导的小鼠血小板聚集率下降，与4mg/kg氟西汀组和对照组比较，差异均有统计学意义。16mg/kg氟西汀组血小板聚集率低于8mg/kg氟西汀组，差异有统计学意义。
4．小鼠在连续服用8mg/kg氟西汀和16mg/kg氟西汀两周后，凝血酶诱导下的血小板P选择素表达和活化态GPIIb-IIIa表达下降，与4mg/kg氟西汀组和正常组比较均差异有统计学意义。但静息态GPIIb-IIIa总表达量，各组间比较差异无统计学意义。
5．8mg/kg氟西汀和16mg/kg氟西汀连续服用两周后，小鼠血小板表面GPIbα表达显著性下降，与4mg/kg氟西汀组和对照组比较，差异均有统计学意义。16mg/kg氟西汀组血小板表面GPIbα表达少于8mg/kg氟西汀组，差异有统计学意义。
6．相关性分析发现氟西汀连续服用两周后，小鼠出血时间和5羟色胺水平、血小板颗粒释放、GPIbα表达、GPIIb-IIIa活化和血小板聚集功能存在相关性。
7．氟西汀处理组停用氟西汀两周后，小鼠血小板5羟色胺水平，出血时间，血小板对凝血酶诱导活化和聚集反应的检测结果与正常对照组比较差异无统计学意义。
8．4mg/kg氟西汀组小鼠出血时间，凝血酶诱导血小板反应和血小板表面GPIbα表达情况在给药后和停药后均与正常对照组比较差异无统计学意义。
结论
SSRI类药物氟西汀的持续使用使血小板5羟色胺水平下降。氟西汀影响血小板的止血功能和血小板聚集功能，诱发出血倾向。氟西汀对凝血酶诱导下的血小板颗粒释放作用和GPIIb-IIIa活化产生抑制效应。而这类SSRIs相关的血小板功能改变可能和凝血酶受体GPIbα表达下调有关。由于GPIbα参与血小板粘附作用，因此亦提示氟西汀可能影响血小板粘附功能。凝血酶诱导的血小板聚集、GPIIb-IIIa活化受抑制和出血时间延长相关性最高，提示凝血酶诱导血小板聚集相关功能可能在SSRIs致出血倾向中起主要作用。但这一系列的抗血小板作用是可逆的，提示血小板功能在停药后可自行恢复。本研究给我们对于SSRIs相关异常出血背后的潜在机制提供更全面的理解和新的探讨思路，并且为应对SSRIs所致出血问题提供可能的方向或策略。