第一部分哮喘患者气道上皮SERPINB10的表达及其与嗜酸性粒细胞气道炎症的相关性目的:检测支气管哮喘患者气道上皮刷片细胞中SERPINB10的mRNA水平的表达情况,探索SERPINB10的表达部位,明确气道上皮细胞中SERPINB10的表达水平与气道嗜酸性炎症的相关性。方法:我们选取支气管哮喘患者和健康对照者作为研究对象,先统计了研究对象的一般资料,随后收集患者的诱导痰,对患者进行肺功能和呼出气一氧化氮的测定并通过纤维支气管镜检查获取了所有受试者的气道上皮刷片细胞及气道活检组织,通过Real-time PCR的方法检测气道上皮刷片细胞中SERPINB10的mRNA表达水平,运用免疫组织化学方法检测气道活检组织切片中SERPINB10的表达情况及其在气道上皮细胞中的定位,通过分析哮喘患者刷片细胞中SERPINB10表达水平分别与诱导痰中嗜酸性粒细胞比例、活检标本粘膜下组织内单位面积嗜酸性粒细胞数及呼出气一氧化氮浓度的相关性推测SERPINB10基因与气道嗜酸性炎症的相关性。结果:通过实时荧光定量PCR方法检测气道上皮刷片细胞中SERPINB10在mRNA水平的表达情况,检测结果提示:支气管哮喘患者的气道上皮刷片细胞中SERPINB10在mRNA水平的表达明显高于健康对照者(P<0.0001)。利用气道活检组织切片进行免疫组织化学方法分析的结果显示:SERPINB10阳性染色主要集中在气道上皮细胞的细胞核内,细胞质也有部分阳性染色,且支气管哮喘患者的组织切片中SERPINB10染色阳性的细胞数目明显多于健康对照者。此外,相关性分析的结果显示:支气管哮喘患者气道刷片细胞中SERPINB10的表达水平与诱导痰中嗜酸性粒细胞比例(r=0.3710,P=0.0184)、活检标本粘膜下组织单位面积内嗜酸性粒细胞个数(r=0.4572,P=0.0030)及呼出气一氧化氮浓度(r=0.3446,P=0.0295)均呈正相关。结论:支气管哮喘患者的SERPINB10主要表达于气道上皮细胞的细胞核。与健康对照者相比,哮喘患者气道上皮细胞中SERPINB10的表达在mRNA水平和蛋白水平均有明显增加。哮喘患者气道上皮细胞中SERPINB10的表达水平与其气道嗜酸性炎症呈正相关。第二部分SERPINB10基因参与哮喘的嗜酸性粒细胞气道炎症的机制研究目的:利用哮喘细胞模型探讨SERPINB10基因参与哮喘嗜酸性粒细胞气道炎症的具体机制。探讨SERPINB10在IL-13诱导的人支气管上皮细胞炎性细胞因子表达中的作用。分析支气管哮喘患者气道刷片细胞中SERPINB10的表达水平与炎性细胞因子的相关性。方法:实验采用人支气管上皮细胞的细胞系BEAS-2B细胞及原代正常人支气管上皮细胞NHBE细胞,分别采用普通培养和气液界面培养的方式。通过IL-13干预观察细胞中SERPINB10和炎性细胞因子的表达变化,并通过转染SERPINB10 si RNA抑制细胞中SERPINB10的表达观察炎性细胞因子的表达变化,实验共分为4组:(1)对照组:正常对照+阴性对照si RNA,(2)IL-13干预组:IL-13+阴性对照si RNA,(3)单纯转染组:正常对照+SERPINB10 si RNA,(4)转染后干预组:IL-13+SERPINB10 si RNA。通过Real-time PCR方法检测SERPINB10,POSTN,CCL26的m RNA水平的表达。通过ELISA的方法检测细胞培养上清中POSTN在蛋白水平的表达。通过Real-time PCR检测支气管哮喘患者气道刷片细胞中POSTN的表达情况,并分析其与气道刷片细胞中SERPINB10的表达水平的相关性。结果:IL-13干预组与对照组相比以及转染后干预组与单纯转染组相比SERPINB10、POSTN、CCL26在m RNA水平的表达均明显增加,而转染后干预组与IL-13干预组相比,SERPINB10、POSTN、CCL26的表达明显下降,差异具有统计学意义。支气管哮喘患者气道刷片细胞中SERPINB10的表达水平与POSTN的表达水平呈显著正相关。结论:转染人SERPINB10 si RNA后,BEAS-2B和NHBE细胞中SERPINB10的表达被抑制。同时炎性细胞因子POSTN和CCL26的表达下降。由此得出,SERPINB10基因在IL-13诱导的气道上皮细胞炎性细胞因子POSTN和CCL26的表达中有重要的作用。支气管哮喘患者气道刷片细胞中SERPINB10的表达水平与POSTN的表达水平呈显著正相关,进一步说明SERPINB10与POSTN的表达存在相关性。