论文部分内容阅读
目的:应用micro RNA基因芯片技术检测慢性痛风性关节炎患者血浆中微小RNA(micro RNAs,mi RNAs)的表达谱系,筛选其与正常人血浆中差异性表达的mi RNAs,应用荧光定量PCR(RT-q PCR)技术对部分差异性表达的mi RNAs进行验证分析。同时研究穿虎通痹合剂治疗慢性痛风性关节炎的临床疗效和对差异性mi RNAs表达的干预作用,探讨mi RNAs在慢性痛风中的作用机制,研究穿虎通痹合剂治疗慢性痛风的作用新靶点,为中医药防治慢性痛风提供新的临床和分子学依据。方法:1、采集4例慢性痛风性关节炎和4例健康对照者的空腹血血浆,采用Trizol法提取RNA,运用exqion的LNATM mi RNAs microarray高通量检测筛选mi RNAs的表达谱系,运用聚类分析软件分析差异性表达的mi RNAs。2、扩大慢性痛风性关节炎患者样本量至60例,扩大健康对照组的样本量至30例,采用RT-q PCR方法对部分差异性表达的mi RNAs进行验证分析。3、采用随机、双盲、双模拟、平行对照研究的方法,将195例慢性性痛风性关节炎患者按随机数字表法分为穿虎通痹合剂组、别嘌醇组和对照组,采集患者治疗前、治疗后4周及8周的血浆,运用RT-q PCR方法检测部分差异性mi RNAs,采用酶联免疫吸附法测定趋化因子2(CCL2)和趋化因子8(CXCL8)水平,分析穿虎通痹合剂对差异性表达mi RNAs和趋化因子CCL2、CXCL8的干预作用。结果:1、慢性痛风性关节炎患者血浆中有48个mi RNAs呈差异性表达,其中表达明显上调较对照组≥1.5倍的有36个,分别为mi R-502-5p、mi R-4748、mi R-4726-5p、mi R-10a-3p、mi R-302a-3p、mi R-4251、mi R-5580-5p、mi R-639、mi R-4764-5p、mi R-631、mi R-4531、mi R-1284、mi R-H8-5p、mi R-198;、mi R-4466、mi R-874-3p、mi R-5190、mi R-205-3p、mi R-204-5p、mi R-183-3p、mi R-H1、mi R-1471、mi R-660-3p、mi R-92a-2-5p、mi R-1255a、mi R-505-5p、mi R-765、mi R-4780、mi R-4324、mi R-4738-3p、mi R-4800-5p、mi R-B1-5p、mi R-4455、mi R-5004-3p、mi R-4632-3p、mi R-4634;表达下调较对照组≤1.5倍的有12个,包括mi R-548l、mi R-361-5p、mi R-326、mi R-151a-3p、mi R-486-5p、mi R-769-5p、mi R-130b-3p、mi R-423-3p、mi R-4288、mi R-4732-5p、mi R-584-5p、mi R-339-5p。2、进一步行RT-q PCR验证分析显示,慢性痛风性关节炎患者血浆中mi R-339-5p、mi R-486-5p和mi R-361-5p表达水平明显低于健康对照组,差异均有统计学意义(p<0.05),与mi RNAs基因芯片结果相一致。3、临床试验结果显示,穿虎通痹合剂组、别嘌醇组和对照组患者的基线指标无显著差异(p>0.05)。三组治疗4周后的差值比较,穿虎通痹合剂和别嘌醇组在上调血浆mi R-486-5p和mi R-361-5p和降低血浆CCL2水平方面优于对照组;穿虎通痹合剂在上调血浆mi R-339-5p水平及降低血浆CCL8水平方面优于别嘌醇组和对照组。三组治疗8周后的差值比较,穿虎通痹合剂和别嘌醇组较对照组能更好的上调血浆mi R-486-5p和mi R-361-5p水平,穿虎通痹合剂较别嘌醇组和对照组能更好的上调血浆mi R-339-5p和降低血尿酸水平。意向性分析显示,穿虎通痹合剂和别嘌醇组较对照组能明显降低慢性痛风性关节炎的急性发作率,而穿虎通痹合剂较别嘌醇副作用更少。4、慢性痛风性关节炎患者的血浆mi R-486-5p及mi R-361-5p水平与其疼痛评分和C反应蛋白(CRP)等呈显著负相关。结论:1、慢性痛风性关节炎血浆中mi R-502-5p、mi R-4748等36个mi RNAs表达上调,mi R-339-5p、mi R-486-5p、mi R-361-5p等12个mi RNAs表达下调。48个差异性mi RNAs可能在慢性痛风性关节炎的发病中起重要作用。2、血浆mi R-486-5p及mi R-361-5p水平与慢性痛风性关节炎患者关节疼痛评分等反映炎症严重程度的指标相关,可作为判断病情和临床转归的生物学指标。3、穿虎通痹合剂治疗慢性痛风性关节炎的临床疗效与别嘌醇组相当,它可能通过上调mi R-339-5p、mi R-486-5p、mi R-361-5p等的表达及降低CCL2和CXCL8的水平而发挥治疗慢性痛风性关节炎的作用。同时穿虎通痹合剂的长期应用能有效防治慢性痛风的反复急性发作,而其副作用明显低于别嘌醇,值得临床推广。