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木聚糖酶(E.C 3.2.1.8)是一类以内切方式降解木聚糖分子中β-1,4-木糖苷键的酶系。它对自然界中大量存在的半纤维素起着重要的作用,该酶广泛应用于造纸、食品、饲料添加等方面。其中耐热木聚糖酶由于其耐热性好,被广泛运用于工业生产特别是造纸工业,因此已受到广泛的关注。本研究以高产木聚糖酶的黑曲霉C3486(Aspergillus niger C3486)的基因组为模板,通过PCR扩增出木聚糖酶的特异性条带,连接到原核表达载体pET32a(+),转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后得到目的蛋白,纯化后所得蛋白Xyn-1不具有木聚糖酶活性。而后将木聚糖酶基因连接到真核表达载体pPIC9K,转化至毕赤酵母Pichia pastoris GS115中,纯化所得的木聚糖酶Xyn-2具有一定的酶活性。然后再以Aspergillus niger C3486总RNA为摸板,进行RT-PCR后,重新转化至大肠杆菌中,所得的木聚糖酶Xyn-3也具有一定的酶活性。通过木聚糖酶DNA与cDNA的序列比对,发现该酶的的基因组中且一个大小约为50 bp的内含子。通过生物信息学分析表明,该酶含有187个氨基酸,具有信号肽。并且具有典型的木聚糖酶保守区域,利用在线预测该酶进行三级结的预测,结果表明该酶是一个以β-折叠为主为的蛋白酶,形成一个紧密的球状蛋白。通过Error PCR和DNA Shuffling体外分子进化技术,将来自于黑曲霉与里氏木霉的木聚糖酶基因进行共同进化,获得了耐热性进一步提高的木聚糖酶。