重组大肠杆菌敬钊毒素-Ⅲ(J2Tx-Ⅲ)对肿瘤细胞增殖抑制的研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:deng_95132
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目的:本研究旨在于对敬钊毒素-Ⅲ的基因工程表达产物Trx-JzTx-Ⅲ融合蛋白抑制肿瘤细胞增殖的作用进行评价。  方法:本实验初步筛查了十余种肿瘤细胞系,利用MTT实验方法测定不同浓度,不同剂量的Trx-JzTx-Ⅲ融合蛋白对已知范围的肿瘤细胞的抑制率。从结果中筛选出经该毒素作用后抑制作用明显的细胞系;采用细胞划痕实验检测肿瘤细胞迁移能力;细胞克隆形成实验和软琼脂集落形成实验,计算肿瘤细胞生长抑制率和细胞集落形成率;采用流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞周期,用流式细胞术分析Trx-JzTx-Ⅲ融合蛋白对肿瘤细胞的凋亡率和细胞周期影响的相关性;运用Western blot测定经Trx-JzTx-Ⅲ融合蛋白作用后肿瘤细胞PCNA蛋白表达情况。  结果:Trx-JzTx-Ⅲ融合蛋白作用于Hepal-6细胞12h时获得最大的抑制率为85%,(p<0.05)。细胞克隆形成实验结果显示,Trx-JzTx-Ⅲ抑制肿瘤增殖作用明显且(p<0.05)。软琼脂集落形成实验结果显示,Trx-JzTx-Ⅲ对细胞的相对存活率分别为0.44%、1.2%和7.65%。流式细胞术结果显示,Hepal-6经Trx-JzTx-Ⅲ作用12h后,细胞凋亡率发生明显变化(p<0.05)。Western blot分析发现,Hepal-6细胞中的PCNA蛋白表达受到抑制,且表现出与Trx-JzTx-Ⅲ明显的浓度依赖性关系。  结论:Trx-JzTx-Ⅲ对肿瘤细胞Hepal-6的增殖有一定的抑制作用,并随着浓度的增加细胞毒性也随之增强,且该细胞的凋亡和坏死率也逐渐增加。Trx-JzTx-Ⅲ也能显著提高Hepal-6细胞迁移能力的抑制率,降低相对存活率。说明Trx-JzTx-Ⅲ能一定程度的抑制肿瘤细胞的迁移。在Western blot实验中,Trx-JzTx-Ⅲ可使Hepal-6细胞相关蛋白PCNA表达减弱,导致细胞周期阻滞,说明Trx-JzTx-Ⅲ的药用机理可能是与影响Hepal-6细胞周期有关。
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