莱菔硫烷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

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目的:  探讨莱菔硫烷(Sulforaphane,SFN)对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用,并进一步研究莱菔硫烷在保护内皮细胞损伤中的机制。  方法:  复苏由中国科学院上海细胞库提供的人脐静脉内皮细胞株,37℃、5%CO2条件下培养细胞至 80% 以上融合度时,分组进行干预。实验分组:(1)空白对照组(对照组):细胞正常培养 2.5 小时;(2)过氧化氢组(H2O2组):分别给予 100、200、400、600、800μM 浓度培养细胞 2 小时,选择 400μM 为其最佳干预浓度(后续各组如未特殊注明,默认 H2O2浓度为 400μM);(3)莱菔硫烷+过氧化氢组(SFN+H2O2组):不同浓度 SFN(2.5、5、10μM)预孵育 30 min 后,加入 400μM 的 H2O2继续培养 2h 。收集干预后的各组细胞,用 MTT 法比较细胞活性,流式细胞技术测定细胞内 ROS 水平,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR法)测定细胞内转录因子核因子E2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2) mRNA和血红素加氧酶-1(Heme oxygenase, HO-1) mRNA表达情况。  结果:  与对照组相比, H2O2 组 MTT 法测定的细胞吸光光度值( A值)显著降低(P<0.05),并浓度依赖性的使 A 值下降,SFN+H2O2组细胞吸光光度值高于 H2O2组(P<0.05)。H2O2组 ROS 水平高于对照组(P<0.05),SFN+H2O2组 ROS 水平低于 H2O2组(P<0.05)。H2O2组 Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA 表达水平低于对照组(P<0.05),SFN+H2O2组 Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA 表达水平高于 H2O2组(P<0.05)。  结论:  莱菔硫烷对过氧化氢致 HUVEC 的氧化损伤有保护作用,其机制可能与莱菔硫烷在转录水平激活 Nrf2/HO-1 表达有关。
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