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生产优质羔羊是养羊业中取得高经济效益的重要条件。山羊繁殖性能的充分发挥,不仅体现在产羔率高,还体现在羔羊品质和成活率等性状上。母羊的妊娠维持、胎儿的发育乃至出生后生长情况都依赖于早期胎盘的正常发育。DNA甲基羟化酶TET1蛋白是Fe2+和2-氧化戊二酸依赖性型的双加氧酶家族成员之一,参与调节DNA主动、被动去甲基化机制,将DNA 5-甲基胞嘧啶(5m C)催化羟化为5-羟甲基胞嘧啶(5hm C),并可继续将5hm C氧化为5-醛基胞嘧啶(5f C)及5-羧基胞嘧啶(5ca C),被TDG特异结合进行碱基切除修复达到DNA主动脱甲基化的目的,在维持胚胎干细胞的自我更新和多能性,保证干细胞分化成不同的组织器官有重要意义。但该分子调控妊娠期胎盘发育的分子机制研究尚属空白,鉴于此,本研究首先克隆了山羊Tet1基因,然后探索了其在山羊胎盘不同发育阶段的表达模式,对明确其调控山羊胎盘发育的机理,为山羊的分子育种及相关应用基础研究奠定基础。主要研究结果如下:利用RT-PCR和RACE末端扩增技术,首次克隆得到山羊Tet1基因c DNA,全长序列7056 bp(Gen Bank:KU870424),开放阅读框(ORF)长6507 bp,除终止密码子外翻译2168个氨基酸,预测山羊TET1蛋白分子量为239677.2 Da,是一种亲水性非分泌性、非膜结合的球状蛋白。以DNA为模板扩增得到山羊Tet1基因5’非翻译区启动子序列856 bp,对其进行Cp G岛预测显示所扩增的该序列无明显的Cp G岛,预测得到两个核心启动子区序列分别是GATCAGACCTG TGTCCCCTGCACTGGCAGCCAGATTCTTATCTACTGTAC和TTCTTGAAGTGC ACAGGCTTCTCATTGTGGTGGCTTCTTTTATTTTGGAT。山羊TET1蛋白与TET家族其它成员间的同源性不高,与TET2为24.9%,与TET3的同源性为23.9%,与牛、马、人、猴、小鼠、猩猩、大鼠和猪的同源性分别是95.4%、86.1%、78.3%、78.3%、56.7%、76.5%、57.9%和87.3%,与牛的同源性最高,与小鼠的同源性最低。山羊Tet1组织表达谱分析结果表明,Tet1基因在肌肉中表达最高,在睾丸、子叶、卵巢等与繁殖相关的组织中也有较高的表达,在肝和肾中表达最低,这一结果说明Tet1基因可能参与调控了山羊相关的繁殖生理过程。通过实时荧光定量对Tet1基因在山羊胎盘不同发育阶段中的表达模式分析表明,Tet1在妊娠25 d山羊胎儿胎盘中的相对表达水平极显著高于60 d、90~120 d和150 d的表达(P<0.01),显著高于妊娠20 d和30 d的表达水平(P<0.05),Tet1基因表达量在妊娠25 d、30 d、60 d、90~120 d和150 d期间呈下降趋势。这一结果初步表明Tet1基因在妊娠早期(胚胎植入和胎儿形成)中可能发挥了重要作用。另对Dnmts的定量PCR结果表明,在妊娠早期20、25和30 d山羊胎盘中,甲基化标记物Dnmt3a的相对表达量呈增加趋势,在妊娠30 d的胎盘中Dnmt1的表达极显著高于其他任何阶段的Dnmt1;免疫荧光组织化学实验发现,DNA甲基化标记物5m C在山羊妊娠早期(20 d、25 d、30 d)中表达较弱。本研究首次成功克隆了山羊Tet1基因,c DNA全长为7056 bp(Gen Bank:KU870424),初步发现Tet1基因在妊娠早期山羊胎盘发育和去甲基化机制中发挥了重要作用,为进一步研究该基因生物学功能及其在胎儿胎盘上的相关调控机制奠定了基础。