病毒性疾病一直是危害我国动物养殖业的主要疾病,因为缺乏有效的治疗药物,目前主要应用疫苗进行预防,配合免疫增强剂能进一步提高免疫效果。然而一些油乳类、铝胶类等化学佐剂常有副作用大、局部刺激重、致癌以及制备麻烦或不能足够提高弱抗原的免疫原性等弊端。因此研制高效、低毒的抗病毒药物和新型免疫增强剂成为亟待解决的课题。研究证明,许多中药具有抗病毒和增强免疫的作用,且应用安全。本研究根据文献检索选择有抗病毒和增强免疫作用的氧化苦参碱、黄芪多糖等7种中药成分,并组成复方,比较了它们抗鸡新城疫病毒和对新城疫疫苗免疫效果的影响。试验分为以下八个部分：试验一、7种中药成分对鸡胚成纤维细胞的安全浓度和生长的影响选择氧化苦参碱(OM)、甘草酸(GA)、绿原酸(CA)、栀子苷(GP)、虎杖苷(PD)、木犀草素(LT)、黄芪多糖(APS)等7种中药成分为研究对象,分别用细胞维持液倍比稀释成10个浓度,OM、APS、GP、PD为2000～3.91μg/mL,GA、CA为1000～1.95μg/mL,LT为50～0.09 gg/mL,加入到鸡胚成纤维细胞的培养体系中,用MTT法测定A570值和形态观察结果判定它们对鸡胚成纤维细胞增殖的影响。结果表明,7种中药成分的最大安全浓度分别为PD 500μg/mL,APS和GA 250μg/mL,GP和CA 125μg/mL,OM 31.25μg/mL,LT 3.13μg/mL；7种中药成分在合适的浓度均能促进细胞生长,作用强度依次为GA>CA>PD>OM>GP>APS>LT.试验二、7种中药成分对新城疫病毒感染细胞能力的影响将7种中药成分稀释成安全浓度范围内的高、中、低3种浓度(μg/mL):PD,500、250、125; GA,250、125、62.5；APS和CA,125、62.5、31.25；OM和GP,32、16、8；LT,1.6、0.8、0.4。分别与新城疫病毒以先加中药后加病毒、先加病毒后加中药、中药与病毒同时加入3种方式加入到鸡胚成纤维细胞的培养体系中,用MTT法测定新城疫病毒感染细胞能力的变化。结果表明,先加中药后加病毒时,OM、GA、APS在高、中浓度和GP在高浓度显著抑制病毒感染细胞；先加病毒后加中药时,OM在高、中浓度和APS在中、低浓度显著抑制病毒感染细胞；中药与病毒同时加入时,APS在高、中、低浓度、OM在高、中浓度和GA在高浓度显著抑制病毒感染细胞。综合比较,4种中药成分抑制病毒感染细胞能力作用依次为OM>APS>GA>GP、试验三、4个中药成分复方对鸡胚成纤维细胞的安全浓度和生长的影响选择OM、APS、GP和GA 4种中药成分分别按一定比例组成OM-APS、OM-APS-GP、GA-APS和GA-APS-GP 4个复方,分别用MEM培养液倍比稀释成1000～1.95μg/mL10个浓度,分别加入到鸡胚成纤维细胞的培养体系中,用MTT法测定4个复方对鸡胚成纤维细胞增殖的影响。结果表明,OM-APS、OM-APS-GP、GA-APS-GP对CEF的最大安全浓度为1000μg/mL, GA-APS为500μg/mL; OM-APS、OM-APS-GP、GA-APS在500～1.961μg/mL,GA-APS-GP在500～3.92μg/mL显著促进CEF生长,OM-APS-GP的作用最强,其次为OM-APS。试验四、4个中药成分复方对鸡新城疫病毒感染细胞能力的影响将OM-APS、OM-APS-GP、GA-APS和GA-APS-GP 4个复方用细胞维持液稀释成安全浓度范围内的高(500μg/mL)、中(250μg/mL)、低(125μg/mL)3种浓度,分别与新城疫病毒以3种方式加入到鸡胚成纤维细胞的培养体系中,用MTT法测定A570值判定其对鸡新城疫病毒感染细胞能力的影响。结果表明,先加中药后加病毒时,4个复方的3个浓度显著抑制病毒感染细胞；先加病毒后加中药时,OM-APS的3个浓度、OM-APS-GP的中、低浓度、GA-APS的高、中浓度和GA-APS-GP(?)勺高、低浓度显著抑制病毒感染细胞；中药与病毒同时加入时,OM-APS的高、中浓度、OM-APS-GP的中、低浓度、GA-APS的高、低浓度和GA-APS-GP高浓度显著抑制病毒感染细胞。综合3种加药方式,4个复方抑制NDV感染细胞能力依次为OM-APS>OM-APS-GP>GA-APS>GA-APS-GP。试验五、2个中药成分复方及其主药防治鸡ND的效果26日龄非免疫罗曼蛋公鸡570羽随机均分成19组,空白对照组隔离饲养；疫苗对照组用NDV-Ⅳ系疫苗滴鼻、点眼免疫,每羽4羽份；30日龄时,3个预防组分别开始口服1 mg的OM-APS、OM-APS-GP和OM,每天3次,连用7 d；33日龄时各组胸肌注射新城疫强毒攻毒,3个同时给药组分别口服1 mg的上述3种药物,每天3次,连用4 d；于攻毒后12h大部分鸡只开始发病时9个治疗组分别口服高(2 mg)、中(1 mg)、低剂量(0.5 mg)上述3种药物,病毒唑对照组口服10 mg病毒唑,每天3次,连用4 d；病毒对照和疫苗对照组不治疗。于攻毒后7d统计各组死亡率、采血测定血清NDV抗体效价、剖检死亡鸡统计器官出血阳性率、存活鸡称重计算总增重和均增重。结果显示,OM-APS各组,OM-APS-GP 6勺高、低剂量组和预防组的死亡率均显著或极显著低于病毒对照组,OM-APS高剂量组、预防组,OM-APS-GP的低剂量组和预防组的死亡率低于病毒唑对照组；OM-APS、OM-APS-GP和OM的高剂量、中剂量、低剂量和预防给药组抗体效价显著高于病毒对照组；OM-APS低剂量、OM-APS-GP高剂量、OM中剂量抗体效价显著高于病毒唑对照组；OM-APS的3个剂量组、OM-APS-GP预防组的盲肠扁桃体出血率显著低于病毒对照组和病毒唑对照组,2个复方的预防组、3个剂量组和同时给药组的腺胃出血率显著低于病毒对照组；OM-APS(?)勺中、低剂量组和OM-APS-GP高剂量组的小肠黏膜出血率显著低于病毒对照组；OM-APS高剂量组和OM-APS-GP预防组的总增重率、OM-APS高、中剂量组和OM-APS-GP预防组的均增重率显著高于病毒对照组和病毒唑对照组。表明,2个复方对ND有较好的防治效果,OM-APS的效果最好。试验六、四种中药成分及其复方对鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响将OM、APS、GA、GP及其复方OM-APS、OM-APS-GP、GA-APS和GA-APS-GP用RPMI1640培养液自15μtg/mL倍比稀释至0.9μg/mL5个浓度(安全浓度范围内),与鸡脾脏淋巴细胞、伴刀豆素球蛋白(ConA)一同加入到96孔细胞培养板中,用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。结果显示,APS、OM、GA、OM-APS、OM-APS-GP和GA-APS的5个浓度、GA-APS-GP在0.9μg/mL的A570值显著高于ConA对照组和细胞对照组(P<0.05)。表明,4种中药成分及其复方能显著促进淋巴细胞增殖,单味成分以APS、复方以OM-APS的作用最强,复方的效果优于单味。试验七、中药成分复方及其组分药对新城疫苗免疫应答的影响14日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡594羽随机均分为11组,除空白对照组外均用NDV-Ⅳ系疫苗滴鼻、点眼免疫,28日龄重复免疫。在首次免疫的同时,OM-APS、OM和APS的高、中、低剂量组分别口服高(4 mg/mL)、中(2 mg/mL)、低(1 mg/mL)浓度的药物1 mL,疫苗对照组和空白对照组口服等量生理盐水,每天1次,连续3 d。分别于14、21、28、35和42日龄采血,用MTT法测定T淋巴细胞增殖的变化,用β-微量法测定血清抗体效价变化。于14、21、28、35日龄,每组随机抽取4羽,称重,剖杀,摘取法氏囊和脾脏称重,计算免疫器官指数。于69日龄用新城疫强毒攻毒,观察保护率。结果表明,OM-APS、OM和APS的高、中剂量组在各时间点的T淋巴细胞增殖、OM-APS的高、中剂量组在各时间点的抗体效价显著高于免疫对照组；OM-APS的3个剂量组在各时间点的脾指数、高、中剂量组在各时间点的法氏囊指数显著高于免疫对照组；OM-APS和APS的3个剂量组、OM中、低剂量组的攻毒保护率高于免疫对照组。试验八、中药成分复方及其组分药对新城疫苗免疫雏鸡血清IL-2、IFN-γ水平的影响14日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡594羽随机均分为11组,除空白对照组外均用NDV-Ⅳ系疫苗滴鼻、点眼免疫,28日龄重复免疫。在首次免疫的同时,1～9组分别口服高(4 mg)、中(2 mg)、低(1 mg)剂量的OM-APS、OM和APS,疫苗对照组和空白对照组口服等量生理盐水,每天1次,连续3 d。分别于14、28和42日龄采血,用双抗夹心ELISA法测定血清IL-2和IFN-γ的浓度。结果显示,OM-APS的3个剂量组、OM高、中剂量组和APS高、中剂量组在各时间点的血清IL-2浓度显著高于免疫对照组(p<0.05)；OM-APS的高、中剂量组在各时间点、OM-APS低剂量组在42日龄、APS高、中剂量组在28和42日龄、OM中剂量在42日龄的血清IFN-γ浓度显著高于免疫对照组(p<0.05)。表明,OM-APS、OM和APS能促进鸡血清IL-2、IFN-γ的分泌,复方的效果优于组分药。