枳椇多糖的理化性质及生物活性研究

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枳椇,又名拐枣,鼠李科。其肉质果梗含有丰富的营养成分,为药食两用,历史记载其具有独特的清热利尿和缓解酒精中毒等功效。研究表明从枳椇肉质果梗中提取的多糖具有抗氧化、抗肿瘤、抗急性酒精性肝损伤及免疫刺激等功能。本文采用现代研究技术,对枳椇多糖进行分离纯化、理化性质测定、初级结构表征、分子修饰及生物活性研究。获得的主要结果如下:(1)枳椇多糖组分的获取。采用水提醇沉分级法(40%、60%、80%)从枳椇肉质果梗中获得3种枳椇多糖组分,分别命名为HDP1-1、HDP1-2和HDP1-3,碱提法从枳椇水提果渣中获得均一多糖组分SHDPs,得率分别为4.2%、8.6%、6.1%和1.5%。(2)枳椇多糖组分的理化性质测定及初级结构表征。HDP1-1、HDP1-2、HDP1-3和SHDPs的总糖含量分别为(97.26±0.17)%、(92.90±1.02)%、(95.48±2.45)%和(80±2.8)%;HDP1-2和SHDPs蛋白质含量分别为(3.23±0.08)%和(2.3±0.1)%,HDP1-1和HDP1-3均不含有蛋白质;只有SHDPs含有(2.3±0.09)%的糖醛酸。高效液相色谱、紫外吸收光谱、红外光谱及单糖组成分析的结果表明HDP1-1和SHDPs是分子量分别为2187 kDa和4570 kDa的均一性杂多糖,HDP1-1只含有半乳糖,HDP1-2和HDP1-3都含有葡萄糖、鼠李糖和少量半乳糖,HDP1-3还含有少量木糖,SHDPs是由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖这7种单糖组成。对其中的两个均一性多糖(HDP1-1与SHDPs)进行傅里叶红外光谱、部分酸水解、甲基化、GC-MS与核磁共振波谱分析,结果表明HDP1-1可能主要由糖残基(1→,6)-α-D-Galp组成,SHDPs主要包含(1→3)-α-L-Rhap,(1→4)-β-D-Xylp,(1→6)-β-D-Glcp,(1→3)-α-D-Fucp,(1→3,6)-α-D-Galp,(1→3,6)-β-D-Manp,并且1-α-L-Araf和1-α-D-Xylp位于侧链上。(3)新型配合物枳椇多糖-锌离子的研究。利用枳椇碱提多糖SHDPs与Zn2+成功制备出新型配合物SHDPs-Zn2+。在单因素实验基础上,对配合时间、Zn2+的初始浓度和SHDPs与ZnCl2的质量比这3个因素进行优化。正交实验结果显示,在配合时间为24 h,Zn2+的初始浓度为1 mg/mL,SHDPs与ZnCl2的质量比为3:1时,配合率达到最大值,为48.4%。傅里叶红外光谱分析显示Zn2+和SHDPs发生了相互配合,主要的配合方式是SHDPs表面的羟基、亚甲基和芳环与Zn2+产生了电荷的相互作用及物理吸附。(4)枳椇多糖组分及其配合物的生物活性研究。体外乙醇脱氢酶活性检测结果显示碱提多糖组分SHDPs对ADH活性具有一定的激活作用,体外抗氧化研究表明SHDPs对DPPH和ABTS自由基有极好的清除效果,同时还有一定水平的超氧阴离子清除活性和Fe2+螯合能力。枳椇多糖的免疫调节活性实验结果表明HDP1-1、HDP1-2、HDP1-3和SHDPs对巨噬细胞RAW264.7无毒性,均能一定程度上刺激RAW264.7的增殖,促进其释放NO和增强其吞噬中性红的能力。通过MTT法检测到HDP1-1、HDP1-2和HDP1-3均能一定程度上抑制肿瘤细胞HepG2的生长增殖,其中HDP1-3的抗肿瘤活性较强。SHDPs及其与Zn2+配合物的抗肿瘤活性研究结果显示枳椇多糖-Zn2+配合物的抗肿瘤活性与原糖相比有明显增强。
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