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骨质疏松（Osteoporosis, OP）是一种伴随着骨量降低和骨微观结构退化从而导致骨易碎性，骨折发生增加的系统性骨骼性疾病，是一种常见多发病。其早期症状不明显，大多数患者直到发生骨质疏松性骨折，严重影响患者的健康和生活质量。目前治疗骨质疏松的药物中相当一部分药物给患者带来副作用。故探究治疗骨质疏松的作用机制及寻找高效低毒的天然药物有着重要的意义。葛根（Pueraria Lobata）是野葛或干葛藤的根，属于爬行类豆科植物。具有解热抗炎，降低血管阻力增加冠状血流量等多种功效。文献报道，异黄酮（Isoflavones）是黄酮化合物中的一种，对骨质疏松的治疗有确切疗效。本课题采用卵巢去势手术和糖皮质激素诱导大鼠骨质疏松模型，探究葛根总黄酮（total flavones of PuerariaLobata, TFPL）对骨质疏松的保护作用及可能的机制。目的本研究通过建立卵巢去势手术和糖皮质激素诱导的大鼠骨质疏松模型研究葛根总黄酮（total flavones of Pueraria Lobata, TFPL）对骨质疏松的保护作用，并探讨可能的作用机制。内容1.通过去势手术诱导大鼠骨质疏松模型，观察葛根总黄酮对去势大鼠骨质疏松的作用。2.通过醋酸泼尼松诱导大鼠继发性骨质疏松模型，观察葛根总黄酮对醋酸泼尼松诱导大鼠骨质疏松的作用。方法1.采用卵巢去势手术诱导大鼠骨质疏松模型，随机分为正常组、去势模型组、假手术组、替勃龙组（1.25mg/kg）和葛根总黄酮（50、100、200mg/kg）给药组。给予葛根总黄酮12周的治疗后，对药效指标进行研究与评价。（1）测量大鼠子宫湿重和子宫指数。（2）双能X射线骨密度仪测定各组大鼠右股骨骨密度（bone minernal density,BMD）和骨矿物含量（bone minernal content, BMC）。（3）三点弯曲实验测左股骨生物力学的性能。（4）左胫骨HE染色做组织形态学分析，观察大鼠骨组织微观结构的变化。（5）ELISA法测尿液的羟脯氨酸（hydroxyproline, HOP）、血清骨特异性碱性磷酸酶（bone specific alkaline phosphatase, BALP）、卵泡生成素（follicle-stimulating hormone, FSH）、黄体生成素（luteotropic hormone, LH）和雌激素（estrogen, E2）水平。（6） RT-PCR法检测下丘脑促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasinghormone, GnRH）、雌激素受体α（estrogen receptorα, ERα）和雌激素受体β（estrogen receptorβ, ERβ）mRNA的水平。2.采用醋酸泼尼松诱导大鼠骨质疏松模型，随机分为正常组，醋酸泼尼松模型组，葛根总黄酮（50、100、200mg/kg）给药组和替勃龙组(1.25mg/kg)。给予葛根总黄酮12周的治疗后检测指标如下：（1）双能X射线骨密度仪测定各组大鼠腰椎（L3-L4）骨密度（BMD）和骨矿物含量（BMC）。（2）三点弯曲实验测左股骨生物力学的性能。（3）左胫骨和右肾上腺HE染色做病理组织形态学分析。（4）ELISA法测尿液的羟脯氨酸（HOP）和血清骨特异性碱性磷酸酶（BALP）水平。（5）RT-PCR法检测下丘脑促性腺激素释放激素（GnRH）、肾上腺皮质激素（CRH）、雌激素受体α（ERα）和雌激素受体β（ERβ）mRNA的水平。结果1.去势模型组大鼠子宫湿重和子宫指数均显著降低，提示去势手术模型成功。2.葛根总黄酮显著增加去势大鼠右股骨BMD和BMC、左股骨最大荷载、提高骨干重，骨灰重和骨灰重/骨干重。提示葛根总黄酮可改善去势手术引起的骨量和骨生物力学性能的降低。3.葛根总黄酮使去势大鼠骨小梁变粗变密，骨的连续性好，排列尚规则，成网状结构。且给药后可显著升高去势大鼠左胫骨平均骨小梁厚度和平均骨体积分数，并降低平均骨小梁间距，提示葛根总黄酮可显著增强保持骨微观结构。4.葛根总黄酮可显著降低去势大鼠尿HOP和血清BALP、FSH和LH水平，提示葛根总黄酮可能是通过调节下丘脑-垂体-性腺轴来调节FSH，降低骨代谢。5．葛根总黄酮给药后，去势大鼠下丘脑GnRH，ERα和ERβmRNA水平的表达明显上调。6.经过12周的醋酸泼尼松给药后，大鼠的腰椎体（L4-L5）的BMD和BMC显著降低提示造模成功，葛根总黄酮可显著提高醋酸泼尼松诱导性大鼠腰椎（L4-L5）的BMD和BMC、左股骨生物力学性能、右肱骨骨干重、骨灰重和骨灰重/骨干重。7.葛根总黄酮不仅可使醋酸泼尼松诱导大鼠骨小梁变粗变密，厚度较均匀，保持立体网状结构，还可以使肾上腺保持球状带、束状带和网状带形态规则，厚度均匀。8.葛根总黄酮可显著降低醋酸泼尼松诱导大鼠尿HOP和血清BALP水平，提示葛根总黄酮可降低骨转换。9.经过12周的给药后，葛根总黄酮可显著上调醋酸泼尼松诱导大鼠下丘脑GnRH、CRH、ERα和ERβmRNA水平。结论去势手术和醋酸泼尼松诱导大鼠骨质疏松可以很好的模拟人类典型的骨质疏松症状。给予葛根总黄酮12周的治疗后，其可提高去势手术和醋酸泼尼松诱导的大鼠的骨密度和骨生物力学性能等指标对骨质疏松有一定的保护和治疗作用，其保护治疗的机制可能与减少骨吸收降低骨转换有关。FSH与ER在骨重塑的过程中起到至关重要的作用，在去势手术诱导的骨质疏松模型中，葛根总黄酮可能通过降低血清FSH水平上调机体ER mRNA水平调节骨重塑，达到骨保护治疗的作用。在醋酸泼尼松诱导骨质疏松的模型中，葛根总黄酮可能是通过上调机体CRH和ER的mRNA水平达到对骨丢失的保护治疗作用，但具体的调控机制有待于进一步探究。