香椿叶有效成分的提取分离及其生物活性

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香椿叶是楝科植物香椿的叶子,在中医中具有清热解毒,润肠止血,健胃理气,杀虫固精等显著的药理功效。香椿嫩芽是人们非常喜爱的时令蔬菜,老叶作为一种丰富的资源未被充分利用,有关香椿叶活性成分也很少报道。研究香椿叶有效成分和生物活性,有助于充分利用该植物资源,为深入研究和开发提供理论依据。采用响应面分析法对超声辅助提取香椿叶黄酮的工艺条件进行优化,最佳提取条件为:乙醇浓度为70%,液料比为30:1(v/w),提取时间为90min,超声功率为320W,提取温度为70℃,在此条件下,黄酮的提取率为51.16mg芦丁当量(RE)/g,ORAC值为3538μmol Trolox当量(TE)/g。对香椿叶黄酮粗提物进行抗氧化、抗增殖和降血糖活性研究,结果显示,香椿叶黄酮粗提物表现出强的DPPH和ABTS自由基清除能力,IC50值分别为0.24和0.67mg/mL。黄酮粗提物对人肝癌HepG2和乳腺癌MCF-7细胞增殖均表现出抑制作用,IC50值分别为338和276μg/mL。黄酮粗提物对糖尿病关键酶(猪胰腺-淀粉酶、鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶)具有一定的抑制作用,对三种酶抑制活性的IC50值分别为0.33、2.08和3.22mg/mL。分别用不同极性的溶剂萃取黄酮粗提物,得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水相的萃取物。同时,对五个相萃取物进行生物活性筛选,结果发现生物活性成分主要集中于乙酸乙酯部位。采用聚酰胺柱层析,中低压制备液相色谱对乙酸乙酯部位进行分离纯化,得到4个单体化合物。利用IR、MS、NMR波谱解析技术,以及各种文献资料对比,鉴定这四个化合物分别为:槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(QLR)、山奈酚-3-O--L-鼠李糖苷(KLR)、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖(PGG)和没食子酸乙酯(EG)。考察四个单体化合物的生物活性。结果发现,四个单体化合物均具有较高的抗氧化活性,抗氧化能力PGG> EG> Vc> QLR> KLR。四个单体化合物均具有一定的肝癌HepG2和乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制作用,KLR的抗癌细胞增殖活性最强。PGG和EG对于糖尿病关键酶活性具有抑制作用,PGG对于-淀粉酶抑制作用的IC50值为0.07mg/mL,EG对于蔗糖酶和麦芽糖酶抑制作用的IC50值分别为0.82和0.81mg/mL。
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