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本文研究了翅荚决明(Cassia alata L.)种子萌发、组织培养以及发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)ATCC15834对翅荚决明的遗传转化。结果如下:
翅荚决明种子最佳升汞消毒时间为20min。采用机械处理和浓硫酸浸种都能大大提高翅荚决明种子萌发率,其中以98%浓硫酸处理种子10~15 min对解除种皮的休眠效果最好,种子的萌发率最高,达到96%。
翅荚决明茎段(不带腋芽)外植体在MS+6—BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L培养基上的愈伤组织诱导率达98.44%,但愈伤组织褐化严重,不能进行增值和不定芽的诱导。
而翅荚决明无菌苗的带腋芽茎段和茎尖外植体可分别在MS+6—BA2.0mg/L和MS+6—BA2.0mg/L+NAA0.1mg的培养基上诱导出芽,培养20d后芽诱导率分别达91.7%和100%。幼芽
在1/2MS+NAA0.2 mg/L的培养基上生根率达85%,且平均生根频率为10.1。幼苗移栽后成活率可达100%。
翅荚决明萌发7~9d的子叶被发根农杆菌ATCC15834感染10~15d后,从形态学下端叶脉处陆续分化出乳白色的不定根,20d后,子叶外植体的生根率高达86.6%。毛状根能在无外源激素的MS培养基上自主生长,呈密集丛生状、多分枝,被大量白色细绒毛。PCR扩增结果证实,发根农杆菌Ri质粒的T—DNA部分已在翅荚决明毛状根的基因组中整合及表达。该结果为今后利用毛状根技术来改良翅荚决明观赏性状等奠定了实验基础和提供可能性。豆科