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前言热休克转录因子（Heat shock transcription factor,HSF）是一组结构和功能具有广泛同源性，普遍存在于真核生物细胞中的蛋白质，其中HSF1在多种应激原刺激下，由无活性的单体形态向有活性的三聚体转化，特别是热刺激可直接激活HSF1。一般情况下，机体在炎症性发热时，体温升高大多数不超过41℃，这种现象称为热限（fever limit），提示体内存在调控体温的自限系统。本研究室以往的研究结果显示HSF1具有降低外周内生性致热原产生的作用，进而限制体温的升高。但是HSF1是否参与了发热时中枢体温调控过程及可能的作用机制还不清楚。本研究旨在进一步探讨HSF1在发热时参与体温调控作用的中枢机制，应用脂多糖（LPS）复制家兔发热模型，观察发热不同时相下丘脑组织中HSF1的聚合与cAMP含量变化的时相关系；同时通过给予槲皮素（quercetin，QCT又称2-（3,4）-3，5,7-五羟黄酮）抑制HSF1的活化，进一步观察LPS致发热过程及下丘脑组织中HSF1和HSP70的表达与cAMP含量的变化。实验方法1、动物分组及模型制备新西兰健康雄性家兔70只，随机分成4组，第Ⅰ组是对照组（N）（5只），向侧脑室注入无水乙醇40μl，10min后经耳缘静脉注射生理盐水1ml／Kg；第Ⅱ组是槲皮素组（Q）（5只），向侧脑室注入槲皮素（2.5μmol／L）40μl，10min后经耳缘静脉注射生理盐水1ml／Kg；第Ⅲ组是LPS组（L）（30只，分6个采样点），向侧脑室注入无水乙醇40μl，10min后经耳缘静脉注射0.5μg／ml的LPS1ml／Kg；第Ⅳ组是槲皮素+LPS组（Q+L）（30只，分6个采样点），向侧脑室注入槲皮素40μl，10min后经耳缘静脉注射LPS。2、体温测定使用SN-2202型数字温度计测量体温。在实验前三天，每天让动物在实验环境中适应3小时。家兔放在特制的兔箱内，将温度计探头插入直肠内10cm并固定于尾根部，待体温稳定后每间隔15min记录一次体温，取三次的平均值作为基础体温。实验过程中每隔10min记录一次体温，直到实验结束。测定即时体温与基础体温之差（△T／℃），最大体温变化值(△Tmax／℃)及体温反应指数（thermal response index，TRI：为体温曲线与时间轴的面积积分）。3、样品采集及检测第Ⅰ、Ⅱ组经耳缘静脉注射生理盐水后在180min时取下丘脑组织；第Ⅲ、Ⅳ组经耳缘静脉注射LPS后分别在0、30、60、180、240、360min时取下丘脑组织，立即投入液氮中速冻固定，20min后存放于-70℃冰箱内保存待测。样品cAMP含量的测定用放射免疫的方法；HSF1和HSP70表达量的检测用Western blot的方法。用电泳凝胶成像分析仪（ChemiImager5500）通过Flour Chen V2.0分析软件测定各组蛋白质带的IDV值，作为HSF1和HSP70的相对含量。4、统计分析所有实验数据采用均数=标准差（（?）±s）表示，采用SPSS11.0软件进行统计分析，采用SPSS11.0软件进行两因素方差分析，相关分析用相关性检验分析法。实验结果1、各实验组家兔的体温变化槲皮素组与对照组比较各时间点的△T无明显差异（P＞0.05）。给家兔静脉注射LPS可引起双峰热，注射LPS后60min时家兔体温上升达第一个高峰（1.32±0.17℃），之后略有回降，在注射后180min时，体温上升达第二个高峰（1.84±0.15℃），第二峰高于第一峰，在360min左右回降至接近基础水平。LPS组与对照组比较，在60～300min期间，△T差异非常显著（P＜0.01）。槲皮素+LPS组的体温变化也呈双峰热，与对照组比较，在60～360min期间，△T差异非常显著（P＜0.01）；与LPS组比较，发热时程延长，发热幅度升高，在240min～360min期间，△T差异显著（P＜0.01）；6h体温反应指数（TRI6）也显著高于LPS组（P＜0.01）。2、下丘脑组织cAMP含量的变化在LPS组，下丘脑中cAMP的含量在注射LPS后60min开始升高，180min达到高峰，360min时回降至基础水平，在60min、180min及240min组cAMP的含量与对照组比较差异显著（P＜0.01）；槲皮素+LPS组各时间点的cAMP含量与LPS组比较明显增加（P＜0.01）。cAMP含量的变化与体温的变化呈正相关（r=0.890，P＜0.01）。3、下丘脑组织HSF1表达量的变化在LPS组和槲皮素+LPS组，下丘脑组织中HSF1的总表达量（包括三聚体和单体）在实验观察期间无明显变化（P＞0.05）；而HSF1三聚体表达量在体温处于高峰值时（180min）明显增加，之后，HSF1三聚体表达量仍继续增多，体温逐渐下降。槲皮素+LPS组的HSF1三聚体的表达量在各时间点均低于对应的LPS组（P＜0.05）。4、下丘脑组织HSF1三聚体表达量与体温及cAMP含量变化的相关分析LPS致发热过程中，在达到体温高峰以后（180～360 min），下丘脑中HSF1三聚体的含量与体温的变化呈负相关（r=-0.897，P＜0.01）；与cAMP的含量变化之间也呈负相关（r=-0.807，P＜0.01）。5、下丘脑组织HSP70表达的变化在下丘脑组织中HSP70的表达水平在给予LPS后180min时达高峰值，且槲皮素+LPS组各时间点HSP70的表达明显低于对应的LPS组，进一步证实槲皮素抑制HSF1激活的作用。小结1、家兔静脉注射LPS可引起双峰热，且第二峰高于第一峰。脑室内给予槲皮素，增强了LPS的致热效果，使发热幅度升高，发热时程延长。2、在LPS致发热过程中，下丘脑中cAMP含量的变化与体温的变化呈正相关。3、在LPS致发热过程中，下丘脑中HSF1的总含量（包括三聚体和单体）无明显变化，而三聚体的含量逐渐增加，体温达最高值后HSF1三聚体含量与体温的变化呈负相关。4、在LPS致发热过程中，体温达最高值后HSF1三聚体含量与下丘脑中cAMP含量的变化呈负相关。结论在LPS致家兔发热过程中诱导下丘脑HSF1聚合，聚合的HSF1可能通过抑制中枢发热介质cAMP的产生而参与限制体温升高。