论文部分内容阅读
目的:去除大鼠双侧卵巢造成雌激素减退以建立大鼠骨质疏松及抑郁样行为模型;以不同剂量的白藜芦醇灌胃,观察其对于去卵巢后造成的大鼠骨质疏松以及抑郁样行为的改善作用,并对其产生改善绝经后骨质疏松及抑郁样行为的可能机制进行探讨。方法:体内实验:1.SPF级健康6月龄SD雌性大鼠60只,随机分为6组,每组10只,去除大鼠双侧卵巢建立模型:(1)假手术组;(2)模型组;(3)白藜芦醇低剂量组:白藜芦醇50mg/kg每天灌胃;(4)白藜芦醇中剂量组:白藜芦醇100 mg/kg每天灌胃;(5)白黎芦醇高剂量组:白藜芦醇200 mg/kg每天灌胃;(6)雌激素组:17β-雌二醇0.8mg/kg每天灌胃。药物干预12周后进行标本取材:比较体重及子宫重量;取长骨行显微CT、HE染色进行形态学比较;取大鼠血清,ELISA检测骨转化指标物;2.在药物干预前及干预结束后均进行动物行为学的检测;在药物干预结束后取血清、大脑各脑区行ELISA检测相关神经递质;体外实验:1.培养成骨前体细胞MC3T3-E1细胞,加入成骨诱导液进行诱导分化,以不同浓度的白藜芦醇进行干预,诱导分化培养21天,以茜素红染色比较钙结节数目;免疫印迹法检测细胞总蛋白中ERK/Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达;2.培养神经元样细胞PC12细胞,以皮质酮干预模拟抑郁细胞模型,以白藜芦醇不同浓度干预,流式凋亡试剂盒检测PC12细胞凋亡,免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白表达。结果:1.去除双侧卵巢12周后,去卵巢大鼠出现骨质疏松,白藜芦醇干预可减少去卵巢大鼠骨丢失,以低、中剂量组为明显。体外实验中,白藜芦醇可以增加MC3T3-E1细胞活性,可以促进其成骨分化;不同浓度白藜芦醇干预后,ERK1/2、β-catenin、BMP-2、p-ERK1/2 蛋白表达增加,其中以白藜芦醇 10μmol/L、20μmol/L组明显;同时白藜芦醇10μmol/L、20μmol/L组干预后LPL、GSK-3β和PPAR-γ蛋白表达下调。表明白藜芦醇改善骨质疏松的作用机制可能与白藜芦醇调控ERK/Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白以促进成骨细胞分化有关。2.去除双侧卵巢12周后大鼠表现出抑郁样行为,白藜芦醇干预对大鼠的抑郁样行为表现出改善作用;与模型组相比较,白藜芦醇干预后大鼠血清、海马脑区、前额叶脑区5-HT含量升高,海马、前额叶脑区GABA含量升高,Glu含量降低;细胞实验显示:白藜芦醇可提高皮质醇干预的神经元样细胞PC12抑郁细胞模型的细胞活性,减轻皮质醇造成的细胞凋亡;其作用机制可能与白藜芦醇调控凋亡相关蛋白减轻皮质醇造成的细胞损伤有关。结论:单纯的雌激素减退可以造成大鼠骨质疏松及抑郁样行为同时发生,而白藜芦醇的干预,可同时起到骨保护及抗抑郁作用,抗骨质疏松作用机制与其调控ERK/Wnt/β-catenin信号通路促进成骨细胞生成有关:其抗抑郁作用与其提高脑内单胺类神经递质水平以及减轻高皮质醇水平造成的细胞凋亡损伤有关。