猪生长抑素基因在大肠杆菌中的融合表达及抗原性鉴定

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  动物的生长和发育受多种因素的调节和控制,包括内分泌系统、体液因素、动物营养水平、遗传与环境因素等。生长激素(GH)在动物生长发育调控过程发挥关键作用。由于生长抑素(SS)可以抑制生长轴激素的分泌,特别是抑制垂体生长激素的分泌,因此利用激素的免疫调控技术,用SS主动免疫动物,能促进动物产生抗SS抗体以中和内源性的SS,解除其抑制作用,使血液中促进生长的激素整体水平提高,从而促进动物生长。   根据猪SS的氨基酸序列及大肠杆菌表达特性,人工合成了SS-28目的基因,在pRSET-A和pET-322a(+)表达质粒上成功地构建了多聚体,即获得重组质粒,然后转化E.coliBL-21(DE3)表达菌,在37℃、1mMIPTG的条件下诱导只有pET-△1SS重组质粒获得表达,其它重组质粒都未能表达。   pET-△1SS重组质粒成功转化E..coliBL-21(DE3)表达菌后,在终浓度0.5mMIPTG诱导下表达3h,表达产物用SDS-PAGE检测。   将纯化复性的Trx-△1SS融合蛋白与弗氏完全佐剂1:1乳化,制成免疫乳化疫苗。选择21天龄断奶的SPF级BALB/c小鼠150只,用二次随机按序分组法分为生理盐水对照组、低剂量处理组和高剂量处理组,每组50只,雌雄各半。BALB/c小鼠预饲3天后,皮下注射免疫乳化疫苗,注射剂量为低剂量组15μg/只、高剂量组30μg/只,整个试验期为五周。然后分别在免疫后两周(38天龄)、四周(52天龄)、五周(59天龄)采集血浆样品,进行ELISA实验,检测抗体水平。   本研究通过基因重组技术,将SS-28目的片段在大肠杆菌中表达,并获得纯化蛋白。以纯化蛋白与弗氏完全佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠,能在一定程度上促进小鼠生长,再次证明了用SS主动免疫动物促进动物生长在实践上是可行的。本研究为SS基因工程苗的下一步研究和应用奠定了基础。
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