论文部分内容阅读
目的:对异硫氰酸苯乙酯(phenthyl isothiocyanate，PEITC)中药单体作用于人胃癌823细胞的体外抑制情况以及其相关分子机制。 方法:①采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法来检测异硫氰酸苯乙酯人胃癌BGC-823细胞株增殖影响情况;②采用流式细胞仪联合AnnexinⅤ/PI双染法检测异硫氰酸苯乙酯作用于人胃癌BGC-823细胞株24h后对该细胞凋亡的影响;③采用Transwell实验方法检测异硫氰酸苯乙酯对823细胞侵袭能力是否有作用;④采用细胞划痕实验方法来验证异硫氰酸苯乙酯是否具有抑制人胃癌细胞BGC-823迁移的能力、采用细胞粘附实验检测异硫氰酸苯乙酯对人胃癌细胞BGC-823粘附能力的影响;⑤采用real time-PCR、Western Bolt两种方法联合进行异硫氰酸苯乙酯诱导胃癌细胞凋亡相关基因(caspase-3、caspase-9、PARP、Bcl-2、Bax、Bcl-xl、Survivin)的检测以及侵袭粘附相关基因(MMP-2、MMP-9、MMP-14、RECK、E-cad)的表达改变情况。 结果:①异硫氰酸苯乙酯在作用人胃癌BGC-823细胞24h后，与空白组比较，可以明显的对该胃癌细胞的增殖起到抑制的效果，并且给药浓度越高效果越佳;②AnnexinⅤ/PI双染法结果表明了异硫氰酸苯乙酯能诱导人胃癌BGC-823细胞发生凋亡现象，13.5uM的给药浓度时对BGC-823胃癌细胞抑制率为12.8％，在浓度为24uM时抑制率高达88.3％，说明抑制作用是呈浓度依赖关系;③real time-PCR、Western Bolt也均证明异硫氰酸苯乙酯对Bcl-2、Bcl-xl、Survivin三种基因起下调作用，而对Bax则是相反的上调，另外可激活caspase-3、caspase-9、PARP的活性;④异硫氰酸苯乙酯作用于人胃癌细胞BGC-823细胞24h后，抑制该细胞侵袭能力开始显现，在浓度为13.5μM和18μM时，观察到侵袭的细胞数量要远远低于对照组，其抑制率达到20.8％±0.75％和67.25％±3.61％，且呈浓度依赖关系;⑤划痕实验显示，异硫氰酸苯乙酯可以有效的抑制BGC-823细胞的迁移能力，而粘附实验很好的证明了异硫氰酸苯乙酯对BGC-823细胞的粘附抑制率是随时间而增长的;⑥real time-PCR、Western Bolt实验检测结果表示RECK的表达与浓度呈正相关，而MMPs家族的表达呈负相关。 结论:异硫氰酸苯乙酯抑制人胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡作用显著，该中药单体是通过一步步激活caspase家族蛋白酶活性，进而激活Bax家族以及Survivin等基因来达到促进细胞凋亡目的。异硫氰酸苯乙酯对人胃癌细胞BGC-823细胞的有一定的阻碍抑制侵袭转移作用，发挥作用的机制和RECK基因有关，同时也和下调MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白的表达有密切关系。