分子印迹技术在埃博霉素精制纯化中的研究与应用

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埃博霉素是粘细菌纤维堆囊菌产生的一类十六元大环内酯类化合物,具有良好的抗肿瘤细胞活性,在抗肿瘤新药开发领域中表现出广阔的应用前景。但是埃博霉素的分离纯化过程较复杂且成本过高,严重制约了其产业化进程。本论文将固相萃取技术与分子印迹技术相结合精制与纯化埃博霉素,开发高效、低成本的埃博霉素分离纯化新工艺。本论文以固态发酵法生产高纯度埃博霉素,经过纯化后得到纯度为98%的埃博霉素,作为分子印迹聚合物制备所需的模板分子。本体聚合法是一种传统的分子印迹聚合物的制备方法。本研究通过对功能单体的比较及优化,最终确定以甲基丙烯酸为功能单体,在热引发条件下合成了埃博霉素分子印迹聚合物(Molecularly Imprinted Polymer, MIP)。通过条件优化得出埃博霉素:甲基丙烯酸:乙二醇二甲基丙烯酸酯的最佳摩尔配比为1:4:20,其吸附总量达到128 mg/g。对在最佳条件下合成的埃博霉素分子印迹聚合物(MIPs-Epos)分别用红外光谱和扫描电镜进行表征分析。并进一步通过Lagergren准二级动力学方程和Freundlich方程对其吸附动力学和吸附等温线进行了拟合分析,同时以伊维菌素和红霉素作为干扰物对其选择性吸附进行了分析研究。将合成的聚合物作为吸附剂应用到固相萃取中,最终使埃博霉素的纯度提高了43.21%。表面印迹法是分子印迹技术中较为新颖的一种制备方法,与传统的聚合方法相比,该方法形成的结合位点在聚合物的表面,更易于吸附和洗脱模板分子。本研究对硅胶进行硅烷化处理后,在其表面合成了埃博霉素分子印迹聚合物。采用红外光谱和扫描电镜手段对制备的聚合物进行表征分析。并进一步通过Freundlich方程和Scatchard模型的拟合分析,证明硅胶表面分子印迹聚合物中有两种结合位点:高亲和力结合位点的最大吸附量Qmax=26.76 mg/g Kd=0.117 g/L,低亲和力结合位点的Qmax=64.98 mg/g Kd=0.709 g/L。综上所述,本论文将分子印迹技术应用到埃博霉素的分离纯化中,达到了较好的纯化效果,并且分子印迹技术有望成为一种新型的埃博霉素分离技术。
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