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1背景与目的甲状腺癌(thyroid carcinoma, TC)是最常见的甲状腺恶性肿瘤,也是最常见的头颈部恶性肿瘤,约占全身恶性肿瘤的1%-2%,近年来随着早期检测手段的增加,其检出率呈上升趋势。甲状腺癌按组织病理学类型可分为：乳头状癌、滤泡状癌、髓样癌、未分化癌,其中髓样癌起源于滤泡旁细胞,其他类型起源于甲状腺滤泡上皮细胞。甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)是甲状腺癌病理类型中最常见的类型。凋亡抑制蛋白(IAPs)是一类十分重要的抗细胞凋亡蛋白因子,它在肿瘤尤其在恶性肿瘤的发生、发展中发挥着重要的作用,IAPs通过直接结合并抑制起始和效应半胱氨酸蛋白酶(Caspase),继而对线粒体及Fas介导的凋亡发挥相应的抑制作用。X染色体连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis XIAP)是IAP家族中抑制细胞凋亡作用最强也是最广泛的成员,可以使细胞内凋亡程序受抑制。X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1 (X-linked inhibitor of apoptosis protein associated factor-1 XAF1)是Fong等发现的凋亡促进因子,XAF1能够拮抗XIAP对Caspases的结合及抑制,从而促进细胞凋亡。相关研究表明,XAF1通过增加肿瘤细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)、肿瘤坏死因子a(TNF-a)等因子敏感性,并与上述因子协同作用于肿瘤细胞使之生长受抑制,因此,XAF1参与了肿瘤细胞凋亡过程,并在其中发挥着重要作用。甲状腺癌的发病机制至今仍不清,哺乳动物DNA启动子甲基化是表观遗传学研究较深入的领域之一,它与组蛋白修饰相联系并与其相互作用,通过改变染色质的结构调节基因的功能。DNA甲基化是在CpG岛中的胞嘧啶上结合了一个甲基基团,这种在CpG岛中的胞嘧啶广泛发生的甲基化,导致了基因的沉默。有研究表明,很多的抑癌基因在不同类型的肿瘤中存在DNA启动子区频繁发生甲基化并且出现其基因沉默的现象。在PTC中XAF1基因启动子区域甲基化及相关蛋白表达异常,国内外鲜有报道。因此,本研究通过检测70例PTC及癌旁非癌组织(non-carcerous epithelium, NCE)标本中XAF1基因mRNA表达异常,探讨其与PTC发生、发展的关系及其临床意义,为PTC的生物学治疗提供理论依据。检测在PTC及NCE中XAF1基因启动子甲基化改变,探讨其DNA启动子区甲基化与甲状腺乳头状癌的关系及做为诊断标志物的可能。2材料与方法：1：70例PTC及切缘与癌灶相隔2cm的癌旁非癌上皮(NCE)组织标本均来自于2010年4月至2010年9月郑州大学第一附属医院甲状腺外科手术标本,所有标本均经病理科常规病理检查证实为甲状腺乳头状癌及癌旁非癌组织。70例标本来源患者术前均未接受过放化疗及其他免疫学治疗。组织标本保存于-80℃低温冰箱中。2：采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术及免疫组化(SP法)检测XAF1基因mRNA及蛋白表达,采用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR,MSP)检测XAF1基因启动子甲基化情况。3：实验数据采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析。其中两样本率的比较采用四格表资料的χ2检验,两样本定量检测采用t检验,以P<0.05为差异显著性的标准。3结果：1:XAF1 mRNA在PTC中的表达量相对值为(0.12±0.03),明显低于NCE的表达量(0.53±0.05), (t=2.13, P<0.05), XAF1基因mRNA的表达与患者的病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05)。2：在NCE中,无一例出现XAF1基因启动子甲基化,而在PTC组织中有35.7%(25/70)出现甲基化(P<0.01),且甲基化状态与PTC的TNM分期、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05); NCE和PTC中,XAF1蛋白表达的阳性率分别为100%(70/70)和55.7%(39/70)(P<0.01)。在PTC中,病理分级Ⅰ级和Ⅱ级组,XAF1蛋白阳性率分别为67.5%(27/40)和40.0%(12/30),在淋巴结转移阳性和阴性组中分别为35.7%(10/28)和69.0%(29/42),以上两组比较差异有统计学意义(P<0.05)；XAF1基因启动子甲基化与其蛋白表达有明显的相关性(P<0.01)。4结论：1:XAF1基因mRNA在PTC中明显表达下调或缺失,且与患者的病理分级及淋巴结转移有关。在NCE中表达正常。提示XAF1基因在PTC的发生、发展中可能起着重要的作用。2：本研究发现,在PTC中,XAF1基因启动子甲基化为XAF1基因功能失活的重要机制之一,且与PTC的TNM分期、病理分级及淋巴结有无转移有关。3:XAF1基因蛋白在PTC中的表达与患者的病理分级及淋巴结有无转移有关,检测该蛋白有望成为PTC早期检测及判断预后的生物学指标之一。4：在PTC中,XAF1基因启动子甲基化与其蛋白表达有明显的相关性。