头孢菌素类药物（Cephalosporins）是一族β-内酰胺类广谱抗生素，具有抗菌活性强、疗效高、毒性低等特点。生产这类抗生素的前体头孢菌素C（Cephalosporin C，CPC）由顶头孢霉（Cephalosporium acremonium）发酵生产。用基因工程改造的方法获得高产菌种是进行菌种改良的有效途径。 为了方便的进行顶头孢霉菌的基因工程改造，首先必须构建适合在顶头孢霉中进行基因组整合的启动子，以及整合质粒等工具。本文通过PCR的方法，成功克隆了产黄青霉异青霉素N合成酶（IPNS）启动子pcp Cp（1．16kb）、顶头孢霉异青霉素N合成酶（IPNS）启动子pcpC（452bp），经酶切和测序验证，与NCBI上报道的序列一致。这些启动子可以被顶头孢霉的RNA聚合酶识别，用于启动异源基因在顶头孢霉中的表达。 为了制备VHb抗体用于免疫印迹检测，需要获得较高纯度的VHb蛋白，构建了pET28a-vgb重组质粒，并发现vgb基因的第二个氨基酸编码是影响VHb蛋白表达的决定因素。当该位点突变成缬氨酸时几乎不表达VHb蛋白。 为了实现外源基因的在顶头孢霉中的表达，摸索了顶头孢霉原生质体制备和再生的条件。确定了顶头孢霉传代培养基；用于制备原生质体的培养基为改进型蔗糖液体培养基，培养条件为28℃，150rpm摇瓶培养；采用含0．6mol·L-1的NaCl溶液作为渗稳剂的再生培养基进行再生；采用1000unit·mL-1的Lywellzyme酶进行酶解，0．6mol·L-1的NaCl溶液作为渗透压稳定剂，原生质体数可以达到5．86×106个·ml-1，再生率达41%。 为将vgb基因整合至顶头孢霉基因组中，本文构建了顶头孢霉转化载体pDH25-pcpC-vgb。该质粒以潮霉素B抗性（hph）作为筛选标记。顶头孢霉RNA聚合酶能够识别pcpC启动子和PtrpC启动子，分别启动vgb基因和潮霉素B抗性基因的表达，vgb基因和潮霉素B抗性基因共用TtrpC终止序列。为进一步转化顶头孢霉奠定了基础。