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本论文以贵州从江香猪为试验动物,采用PCR技术、实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)、分子克隆、细胞培养、细胞转染等技术,对FoxO4、PRKAA1基因分别从分子、细胞水平进行研究。研究结果如下:1.FoxO4、PRKAA1基因在从江香猪不同组织中表达量的差异研究。采用qRT-PCR方法对从江香猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、背最长肌和脂肪9个不同组织样mRNA表达量进行检测,分析FoxO4、PRKAA1基因在不同组织中的差异表达。结果显示:FoxO4基因在脂肪组织中表达量最高;PRKAA1基因在肺组织中表达量最高,在脂肪组织中表达量次之。2.成功克隆从江香猪FoxO4、PRKAA1基因的CDS区,构建真核表达载体pEGFP-N3-FoxO4、pEGFP-N3-PRKAA1。以cDNA为模板,设计引物,扩增FoxO4、PRKAA1基因的完整CDS区。将PCR的胶回收产物分别与真核载体pEGFP-N3连接,构建真核表达载体pEGFP-N3-FoxO4、pEGFP-N3-PRKAA1。3.从江香猪肌内和皮下脂肪前体细胞的原代培养。采集5日龄从江香猪背最长肌和皮下脂肪组织,利用胶原酶消化法,分别从此两种组织中分离获得脂肪前体细胞。进一步扩大培养,油红O染色法鉴定,诱导分化,利用qRT-PCR方法检测脂肪细胞各分化相关基因PPARγ、LPL、FAS、ACC、ATGL、HSL的表达情况。结果显示,肌内和皮下脂肪前体细胞培养成功。在皮下脂肪前体细胞分化中发现,PPARγ、LPL、FAS、ACC、ATGL、HSL在细胞分化早期均呈现较高表达,而在肌内脂肪前体细胞分化中发现,PPARγ、LPL、FAS、ACC、ATGL、HSL在细胞分化后期呈现较高表达。4.探究FoxO4、PRKAA1基因对脂肪代谢的影响。本研究将重组质粒pEGFP-N3-FoxO4、pEGFP-N3-PRKAA1分别转染肌内和皮下脂肪前体细胞,利用qRT-PCR方法检测FoxO4、PRKAA1基因过表达后,两种细胞相关分化基因PPARγ、LPL、FAS、ACC、ATGL、HSL的表达情况。结果显示,在皮下脂肪前体细胞中转染重组质粒pEGFP-N3-FoxO4、pEGFP-N3-PRKAA1后,各相关分化基因PPARγ、LPL、FAS、ACC、ATGL、HSL的表达均显著上调。而在肌内脂肪前体细胞中转染重组质粒后,各相关分化基因只有个别基因表达上调,其他基因间均差异不显著。说明FoxO4、PRKAA1基因对脂肪代谢具有一定的调控作用,以期为我们进一步了解脂肪代谢机制提供理论依据。