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DHA在人体中有许多重要的生理作用,对维持人体健康是不可或缺的,研究还发现其对改善高血压、关节炎、抑郁症等也有显著效果。DHA由于具有这些特殊生理作用,现今已成为高附加值、市场需求广泛的产品。现今对DHA研究主要集中于利用转基因手段在各种作物和微生物中大量、廉价生产DHA。
为利用转基因技术在酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中生产二十二碳六烯酸(DHA,22:6△4,7,10,13,16,19n-3),本文通过基因重组的方法构建了同时含破囊壶菌Thraustochytrium sp.FJN-10△5脂肪酸延长酶(TFD5)基因、△4脂肪酸脱饱和酶(FAD4)基因的共表达质粒PYTFD5-FAD4。该质粒是通过基因重组的方法,使FTD5、FAD4基因置于各自启动子和终止子下获得的。该质粒转化酿酒酵母所构建的重组工程菌,在添加终浓度为2%的半乳糖、终浓度为1%的NP-40和0.3mmol/L的底物二十碳五烯酸(EPA,20:5△5,8,11,14,17n-3)下进行诱导,可直接转化二十碳五烯酸(EPA,20:5△5,8,11,14,17n-3)生成二十二碳五烯酸(DPA,22:5△4,7,10,13,16 n-3)和DHA,从EPA到DHA的转化效率为12.47%。
为进一步提高转化率,通过基因重组的方法构建了同时含TFD5基因、FAD4基因和酿酒酵母细胞色素b5基因的共表达质粒pYTFD5-FAD4-B5,各基因拥有各自的启动子和终止子。该质粒转化酿酒酵母所构建的工程菌在上述诱导条件下,从DPA到DHA的转化效率未见明显提高,表明启动子是影响本实验转化率的主要因素。