两种阿魏化学指纹图谱及其抗消化性溃疡活性的初步研究

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunzheng_1985
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目的:初步建立两种阿魏(多伞阿魏、五彩阿魏)的化学指纹图谱,观察并比较两种阿魏的抗消化性溃疡活性。方法:1)在前期已完成五彩阿魏挥发油提取工艺优选的基础上,以挥发油提取率结合其化学成分含量变化为指标,采用均匀试验设计优选多伞阿魏挥发油的水蒸气蒸馏提取工艺,采用GC-MS对比分析两种阿魏挥发油的化学成分。2)初步建立符合方法学要求的两种阿魏挥发油的GC指纹图谱。3)在前期已完成五彩阿魏水提物提取工艺优选的基础上,以出膏率和主要峰的总峰面积为指标,采用正交试验优选多伞阿魏水提物的提取工艺。初步建立符合方法学要求的两种阿魏水提物的HPLC指纹图谱。4)分别灌胃给予小鼠不同剂量的两种阿魏的挥发油及水提物,连续观察14天试验动物的急性毒性反应症状和生存情况,评价五彩阿魏挥发油及其水提物、多伞阿魏挥发油及其水提物的急性毒性。5)在采用乙醇致溃疡模型动物、药物致溃疡模型动物、乙酸致溃疡模型动物进行抗溃疡试验时,建立一种新的图像分析法处理试验数据、计算溃疡抑制率,并通过与传统测定法比较验证图像分析法的可行性。6)以溃疡抑制率(分别采用传统测定法和图像分析法测定)、血清SOD活性和MDA含量为评价指标,结合病理观察,分别观察两种阿魏挥发油及水提物对乙醇致溃疡模型动物、药物致溃疡模型动物、乙酸致溃疡模型动物的抗溃疡效果。7)采用小鼠扭体法观察两种阿魏挥发油及水提物的镇痛效果。8)采用断尾法和玻片法分别测定小鼠的出血时间和凝血时间,观察两种阿魏挥发油及水提物的止血效果。结果:1)多伞阿魏挥发油优选提取工艺为:加入15倍水,提取4h,平均提取率为3.839%;通过GC-MS在多伞阿魏挥发油中共鉴定出30种化合物,其中主要成分为愈创木醇(58.54%)、金合欢烯(7.25%)、橙花叔醇(6.08%)等。通过GC-MS在五彩阿魏挥发油中共鉴定出25种化合物,其中主要成分为硫代卡巴肼(31.52%)、酚二唑(38.41%)、(E)-3,7-Dimethyl-1,3,6-octatriene(8.32%)、α-蒎烯(6.07%)等。2)初步建立了两种阿魏挥发油的GC指纹图谱,均符合方法学要求。多伞阿魏挥发油GC指纹图谱有20个共有峰,五彩阿魏挥发油GC指纹图谱有20个共有峰,建立的指纹图谱相似度均达到0.9以上。3)多伞阿魏水提物优选提取工艺为:提取3次,每次加入6倍水,提取1.5h。初步建立了两种阿魏水提物的HPLC指纹图谱,均符合方法学要求。多伞阿魏水提物HPLC指纹图谱有13个共有峰,五彩阿魏水提物HPLC指纹图谱有21个共有峰,建立的指纹图谱相似度均达到0.9以上。4)五彩阿魏挥发油造成小鼠急性中毒症状主要有强直性抽搐、呼吸急促等,LD50为491.61mg/kg,95%可信限为422.39—577.8mg/kg;多伞阿魏挥发油造成小鼠急性中毒症状主要有呼吸频率减小、尾部间歇性翘起等,LD50为10240mg/kg,95%可信限为9140.4—11472mg/kg;五彩阿魏水提物造成小鼠急性中毒症状主要有抽搐、呼吸加快等,LD50为17333mg/kg,95%可信限为15536—19183mg/kg;多伞阿魏水提物最大耐受量为21000mg/kg;相较五彩阿魏而言,多伞阿魏具有更高的安全性。5)图像分析法处理的评价结果与传统测定法的评价结果类似,但该法的评价过程更加客观、可靠,有助于减轻试验者的工作量。6)三种溃疡模型中,给药组与模型组相比,均能够使试验动物溃疡指数降低,血清SOD活性升高,MDA含量降低,存在显著性差异(P<0.05),确定两种阿魏的挥发油和水提物对不同模型的消化性溃疡均具有一定的抑制作用,综合评价表明多伞阿魏挥发油抗消化性溃疡效果更为显著。7)与空白对照组比较,给药组的小鼠扭体次数均有显著性差异(P<0.05),提示两种阿魏的提取物均具有一定的镇痛作用,镇痛效果顺序依次为多伞阿魏挥发油>多伞阿魏水提物>五彩阿魏挥发油>五彩阿魏水提物。8)与空白对照组比较,给药组小鼠的出血时间和凝血时间均没有显著性差异(P>0.05),提示两种阿魏的挥发油和水提物无明确的止血作用。结论:1)本文初步建立了两种阿魏挥发油及水提物的化学指纹图谱,该方法精密度、重现性和稳定性良好,为两种阿魏药材质量控制提供了试验依据。2)相较于传统测定方法而言,本文所提出的用于评价溃疡损伤情况的图像分析测定法具有更多优势,有较为明确的应用前景。3)两种阿魏提取物均具有明确的抗消化性溃疡活性与镇痛作用,且多伞阿魏的安全性更高,具有潜在的临床应用优势,为多伞阿魏替代药用阿魏提供了理论依据。
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