鞍带石斑鱼ISG56、ISG15基因的克隆与表达模式分析

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干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)是先天免疫系统中的主要构成之一,在限制细胞间与细胞内的病毒传播与复制方面发挥着十分关键的作用,而且干扰素刺激基因的工作系统可能对靶向目标有效的抗击病毒感染起着至关重要的作用。干扰素刺激基因56(Interferon-stimulated gene 56,ISG56)又被称为IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1)基因,最初被认为是经过干扰素诱导后,可以通过抑制病毒复制和病毒翻译起始过程来产生治疗作用。除了干扰素(Interferon,IFN)之外,许多DNA和RNA类型的病毒都可以刺激诱导isg56基因的表达。干扰素剌激基因15(Interferon-stimulated gene15,ISG15)也是干扰素刺激基因家族的成员,在不同病毒早期应答中发挥着重要的作用。然而在鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)中关于isg56基因和isg15基因的研究尚未见报道,关于isg56基因和isg15基因在鞍带石斑鱼先天免疫中的作用也很少被研究。本研究中,通过生物信息学鉴定分析了鞍带石斑鱼中isg56基因和isg15基因,并且克隆了isg56基因和isg15基因c DNA完整的序列。isg56基因的全长序列为2921bp,包含一个1314bp的开放阅读框,可编码437个氨基酸,预测分子量为50.6k Da,理论等电点为6.10。isg15基因的全长序列为910bp,包含一个468bp的开放阅读框,可编码156个氨基酸,预测分子量为17.09k Da,理论等电点为9.33。经过序列分析和系统发育分析,推导出的ISG56蛋白和ISG15蛋白与其他硬骨鱼中的ISG56蛋白和ISG15蛋白均具有高度的同源性。实时定量PCR(q RT-PCR)检测了健康组织中isg56基因的表达分布和虹彩病毒感染后isg56基因在主要免疫组织脾脏和肾脏中的表达模式,结果显示isg56基因在脾脏、肾脏、肝脏等免疫相关组织中均有着相对量较高的表达。在经过虹彩病毒诱导后,isg56基因在肾脏和脾脏中的表达量在24h均开始上调,且在72h表达量到达最高水平,因此,我们推测isg56基因在鞍带石斑鱼免疫虹彩病毒的过程中可能发挥着重要的抗病毒作用。实时定量PCR检测了健康组织中isg15基因的表达分布和虹彩病毒感染后isg15基因在主要免疫组织脾脏和肾脏中的表达模式,结果显示isg15基因在肝脏、肾脏等免疫相关组织中均有高表达,经过虹彩病毒诱导后,isg15基因在肾脏和脾脏中的表达量在24h均开始上调,且在72h表达量到达最高水平,推测isg15基因在鞍带石斑鱼免疫虹彩病毒的过程中可能发挥着重要的抗病毒的作用。这些研究结果将有助于进一步了解isg56基因和isg15基因在硬骨鱼体内的抗病毒调控机制,对于鞍带石斑鱼抗病分子育种提供了基础数据。
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