miR-193a-3p在食管癌放射抵抗及化疗耐受作用的初步研究

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目的:探讨miR-193a-3p在食管鳞癌放射抵抗及化疗耐受机制中的作用。方法:通过6MV-X射线对四株食管癌细胞进行照射,采用克隆形成法检测出相对敏感株及耐受株细胞;利用MTT方法检测四种化疗药物对四株食管鳞癌细胞的生存率影响;茎环引物实时定量PCR法检测miR-193a-3p在敏感株及耐受株细胞中的表达,分别合成并转染miR-193a-3p的mimic(3PM)或antagomiR(3PA)序列或小干扰RNA(si-PSEN1)以提高或抑制其在细胞中的表达水平,克隆形成法和流式细胞分析术检测miR-193a-3p及其下游基因PSEN1对于放射耐受性及化疗耐受性的影响,Western blot检测r-H2AX、 PSEN1蛋白的表达;细胞增殖实验检测miR-193a-3p与PSEN1对细胞生长的影响。结果:筛选出相对放射敏感细胞株(KYSE150)及耐受细胞株(KYSE410);同时对四种药物最敏感的细胞株为KYSE150,最耐受的细胞株为KYSE410,故将这两株细胞作为后续研究的标本。miR-193a-3p在两株细胞中的表达水平差异显著(1.00:192);KYSE410细胞中转染miR-193a-3pantagomiR,抑制其在细胞中的表达水平,与对照组相比,其放射敏感性及化疗敏感性均增加,细胞凋亡比例显著增加3.63%,差异有统计学意义(P<0.05),同时r-H2AX蛋白表达增加(1.00:1.66)。KYSE510细胞中转染miR-193a-3pmimic,提高其表达水平,与对照组相比,其放射敏感性及化疗敏感性均减小,细胞凋亡比例显著下降11.10%,差异有统计学意义(P<0.05),同时r-H2AX蛋白表达减少(1.00:0.85);在KYSE150中沉默PSEN1表达,与对照组相比,其放射敏感性降低,细胞凋亡比例下降7.07%,差异有统计学意义(P<0.05);在KYSE150中沉默PSEN1及上调miR-193a-3p表达后,与对照组相比,细胞增殖力增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-193a-3p通过调控基因PSEN1促进食管癌细胞放射抵抗性及化疗耐受性,miR-193a-3p和PSEN1可能成为食管癌放化疗耐受的一个潜在标志物。
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