RNAi是指由内源性或外源性双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）介导的细胞内mRNA发生特异性降解，导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能表型缺失。　　 灰飞虱Laodelphax striatellus(Fallen)和褐飞虱Nilaparvata lugens(stal)同属于半翅目(Hemiptera)蝉亚目(Cicadomorpha)蜡蝉总科(Fulgoroidea)中的飞虱科(Delphacidae)，都是全球性粮食作物的重要害虫，不仅能刺吸为害而且还能传播病毒。对稻飞虱的防治主要以化学农药防治为主，不但造成了严重的环境污染，破坏生态平衡，使农药残留增大，对人和其它动物健康构成威胁。因此，需要更清洁安全的防治技术替代传统技术。近几年，越来越多的学者将RNAi技术应用于稻飞虱，试图开发新的防治途径。　　 dsRNA的传导是引发RNAi的关键一环，本研究基于国内外对dsRNA传导的研究，以两种稻飞虱的sid和chc同源基因为研究对象，在活体昆虫中验证两种基因与dsRNA传导的关系，以便寻找切实可行的提高RNAi效应的途径，为在昆虫研究领域更好的应用RNAi技术提供依据。　　 现将主要研究结果总结如下:　　 1、灰飞虱sid-1-like基因和网格蛋白重链基因全长克隆　　 本研究首先利用灰飞虱转录组数据筛选网格蛋白重链（Clathrin heavy chain，Chc）和sid-1-like的基因，获得相关基因片段后进行克隆验证，并设计特异性引物，采用RACE技术进行基因全长克隆，利用序列分析软件对全长序列进行分析。结果显示，克隆chc基因得到的序列长度为5，347bp，ORF编码961个氨基酸，编码的蛋白分子量为110.1078kD，PI为5.36，且具有clathrin7-fold repeat特征区域，聚类分析显示与不同生物Chc基因同源，与其它昆虫Chc聚为一大类，相似度达92％以上。克隆sid-1-like基因获得的序列全长为2，515bp bp，ORF编码648个氨基酸，所编码的蛋白分子量为52.0588kD，PI为8.98，通过氨基酸拓扑结构分析可知克隆的基因与线虫和棉蚜sid-1同源基因的拓扑结构具有极高的相似性，并都具有11个跨膜区域等sid-1-like基因的特征，聚类分析显示与不同生物sid-1-like基因同源，相似度在22％至81％之间，其中与近缘种褐飞虱的sid-1-like基因相似性最高，达到81％。由此认为所克隆的序列全长分别是灰飞虱的Chc同源基因和sid-1-like基因，被分别命名为Lschc和Lssid。该研究为设计dsRNA，利用RNAi深入研究其功能，以及在灰飞虱RNAi中的作用，奠定了基础。　　 2、沉默灰飞虱sid-1-like基因和灰飞虱网格蛋白重链基因对灰飞虱RNAi的影响　　 本研究以灰飞虱几丁质合成酶基因（Lschi）为报告基因，通过两次RNAi手段，测定干扰灰飞虱chc和sid-1-like基因是否影响dschi对灰飞虱网格蛋白重链基因的干扰作用。结果表明，单独喂食dssid及dschc对灰飞虱的死亡率（5.25％和3.98％）和chi基因的相对表达水平（1.33和1.19）没有显著影响，与喂食dsEGFP的对照处理(5.07％;1.0)没有显著差异。表明单独干扰sid和chc不会影响灰飞虱chi基因的表达，也不会影响试虫的死亡率变化。但单独喂食dschi可以显著抑制灰飞虱chi基因的表达，其表达水平仅有对照的40％，同时导致试虫死亡率显著升高(22.78％)，是dsGFP处理的4.6倍。将dschi与dssid或/和dschc混合喂食处理时，dschi对chi基因表达的抑制作用以及对试虫的致死效应，均大幅下降。喂食dssid+dschi、dschc+dschi及dssid+dschc+dschi混合dsRNA的chi基因相对表达量没有显著差异，分别为0.77、0.64和0.81，但显著高于dschi单独处理而低于对照处理。检测试虫的死亡率也得到类似结果，即3种混合处理之间没有显著差异，4d累积死亡率分别为，6.65％、6.61％和7.43％，但显著低于dschi处理(22.78％)高于dsGFP处理(5.07％)。此外，试验还发现调整dssid+dschc+dschi的混合比例对干扰效果没有显著影响。显然干扰sid和chc均会显著影响灰飞虱体内的RNAi，且两者表现的抑制效应相当。由此表明sid和chc均是灰飞虱体内RNAi的重要功能基因。　　 3、沉默褐飞虱sid-1-like和褐飞虱网格蛋白重链基因对褐飞虱RNAi的影响　　 本研究以褐飞虱几丁质合成酶（Nlchi）为报告基因，通过两次RNAi手段，测定了干扰褐飞虱chc和sid基因是否影响dschi对Nlchi基因的干扰作用。结果表明，单独喂食dssid(8.05％)，和单独喂食dschc(15.30％)的死亡率，均显著高于单独喂食dsEGFP的死亡率(2.84％)，而两处理对Nlchi基因的表达水平（1.09和1.26）没有显著影响，与喂食dsEGFP的(1.21)没有显著差异。表明单独干扰褐飞虱sid-1-like和褐飞虱网格蛋白重链不会影响Nlchi基因的表达，但对试虫的有一定的致死效应。单独喂食dschi可以显著抑制Nlchi基因的表达，其表达水平(0.33)仅有对照的33％，同时导致试虫死亡率显著升高(28.29％)，是dsEGFP处理的14倍。将dschi与dssid或/和dschc混合喂食处理时，dschi对Nlchi基因表达的抑制作用以及对试虫的致死效应，均大幅下降。喂食dssid+dschi、dschc+dschi及dssid+dschc+dschi混合dsRNA4d累积死亡率分别为，16.07％、19.63％和19.65％，处理间无显著差异，但显著低于dschi处理(28.29％)高于dsEGFP处理(2.84％)。检测三处理的Nlchi基因相对表达量没有显著差异，分别为1.06、0.77和1.14，但显著高于dschi单独处理(0.33)而低于对照处理。证实干扰Nlsid和Nlchc均会显著影响褐飞虱体内的RNAi，且干扰Nlsid表现的抑制效应略好于干扰Nlchc。进一步表明sid和chc均为与褐飞虱体内RNAi相关的重要功能基因。　　 综上所述，本研究验证并克隆了灰飞虱的sid-1-like基因和网格蛋白重链基因，证实干扰这两种基因可以显著降低灰飞虱和褐飞虱体内的RNAi效应，由此揭示昆虫sid和chc基因均是昆虫体内RNAi的重要功能基因。该研究为进一步阐明昆虫的RNAi机制，以及更好地利用RNAi技术进行昆虫学研究，奠定了基础。