有机磷农药在农业和种植业上的广泛使用，造成食物和环境中普遍存在农药残留的问题，需要对其加强监测。免疫分析方法被认为是一种灵敏、高效、稳定、低成本的微量农药残留筛查检测手段，可弥补大型精密仪器确证技术和酶法检测技术的不足。本研究以二甲氧基硫代磷酸酯类有机磷农药为研究对象，进行了可应用于实际样品检测的农药多残留酶联免疫分析方法研究。　　 首先，根据二甲氧基硫代磷酸酯类有机磷农药的结构特点，设计合成了具有苯环和硫代磷酸酯基团两大特征结构，手臂为1-4个碳原子长度且结构及取代位置不同的13种系列半抗原，使用活泼酯法制备了5种免疫原和13种包被原。通过质谱与核磁共振等波谱技术对半抗原进行鉴定，用紫外扫描和三硝基苯磺酸法对人工抗原进行鉴定，半抗原与人工抗原均合成成功。　　 其次，通过免疫新西兰大白兔制备了5个兔多克隆抗体，对抗体稀释倍数、抗原包被浓度、助溶剂的百分含量、封闭液的种类、一抗及二抗的反应时间等ELISA条件进行了优化，并在此基础上建立了12种二甲氧基硫代磷酸酯类农药的最佳间接竞争ELISA检测方法。该方法对异氯磷(23.1μg/L)、杀螟腈(2.6μg/L)、甲基对硫磷(5.6μh/L)、杀螟硫磷(11.3μ/L)、倍硫磷(2.6μg/L)、伐灭磷（17.8μg/L）、碘硫磷（90.9μg/L）和甲基毒死蜱（104.3μg/L）等8种药物的检测限可以达到国内外的相关限量要求。该方法对自来水及两种叶菜类蔬菜（生菜、菜心）的药物平均添加回收率为71.90‰108.43％，平均变异系数为10.19％~24.16％，均满足检测需求，精密度达到气相色谱检测水平。　　 最后，对ELISA检测灵敏度的影响因素进行了研究。结果表明，免疫半抗原的结构是影响方法灵敏度的最主要因素，手臂太短或引入酰氨键的半抗原所制备的抗体宽谱特异性较差，含有不饱和烷烃手臂的半抗原则可制备出特异性较好的抗体。包被半抗原的结构对方法灵敏度能产生显著影响，使用只含有目标分子部分特征结构的包被原，可以显著提高检测方法的灵敏度。抗体对不同结构农药的检测灵敏度差异较大，对结构与免疫半抗原相似，在苯环上含有较少取代基的药物具有较好的识别能力。