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本研究的目的是提取海洋生物Ⅰ号抗癌活性成分,探讨二甲基亚砜(DMSO)、吐温-80、卵磷脂3种助溶剂对该活性成分的促溶作用,进一步研究该活性成分对人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z、肝癌细胞系Bel-7402、卵巢癌细胞系HO8910PM的生长抑制作用。
[方法]取新鲜海洋生物Ⅰ号,脱水后打碎,95%食用酒精浸泡数次,取浸泡液,旋转蒸发得到乙醇粗提物。采用减压干柱柱层析法将乙醇粗提物用有机溶剂洗脱,依次得到石油醚、乙酸乙脂、正丁醇提取物(以下分别简称提取物A、B、C)。选用DMSO、吐温-80、卵磷脂作为助溶剂,肉眼观察和MTT法测定不同助溶剂对3种提取物的促溶效果,确定最佳助溶剂。用最佳助溶剂溶解海洋生物Ⅰ号3种提取物,MTT法研究其对人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z、肝癌细胞系Bel-7402、卵巢癌细胞系HO8910PM的生长抑制作用,Karber公式计算3种提取物对多种癌细胞生长抑制的IC50值。
[结果]减压干柱柱层析法洗脱海洋生物Ⅰ号乙醇粗提物,依次得到提取物A、B、C。分别采用DMSO、吐温-80、卵磷脂作为助溶剂溶解提取物,发现卵磷脂对癌细胞无毒性作用,对提取物的溶解度最大,溶解的药液清晰透亮,MTT结果显示卵磷脂对提取物的促溶效果最明显。海洋生物Ⅰ号提取物抗癌细胞生长活性实验结果显示:3种提取物对人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z生长均有抑制作用,抑制率随浓度增加而增加,随作用时间延长而提高,呈明显的剂量和时间效应。提取物B的抑制率最高,500μg/ml和1000μg/ml浓度作用48h时的抑制率分别高达90.26%和99.17%,明显高于5-Fu的抑制率(86.65%),统计学差异有非常显著性意义(P<0.01)。提取物C的抑制率稍低,500μg/ml和1000μg/ml浓度作用48h时的抑制率分别为80.46%和90.38%,与5-Fu的抑制率相近。提取物A的抑制率最低,500μg/ml和1000μg/ml浓度作用48h时的抑制率仅为48.75%和60.25%,明显低于5-Fu的抑制率。3种提取物在相同浓度、相同作用时间的抑制率比较统计学差异具有非常显著性意义(P<0.01)。3种提取物对肝癌细胞系Bel-7402、卵巢癌细胞系HO8910PM的抑制作用与对CNE-2Z的抑制作用相似。3种提取物对3种癌细胞生长抑制的IC50测定结果显示,提取物B的IC50值最低,提取物C次之,提取物A最大。以上结果表明,海洋生物Ⅰ号提取物B和C具有较高的抗癌活性,对多种癌细胞均有显著的生长抑制作用。
[结论](1)减压干柱柱层析法能进一步有效提取海洋生物Ⅰ号乙醇粗提物,得到抗癌活性成分。(2)卵磷脂作为助溶剂溶解药物时,药物的溶解度最大,IC50值最低,为最佳助溶剂。(3)海洋生物Ⅰ号提取物A、B、C对人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z、肝癌细胞系Bel-7402、卵巢癌细胞系HO8910PM均有不同程度的生长抑制作用,并且呈时间剂量依赖性,其中提取物B抗癌活性最强,为海洋生物Ⅰ号抗癌的主要活性成分。