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目的 一、通过改进外科技术，探讨建立一种稳定和实用的大鼠异位全小肠移植(SBT)模型方法：三袖套血管吻合法 二、参照树突状细胞(DC)经典分离诱导方案，从大鼠骨髓分离DC及前体，培养扩增未成熟树突状细胞(imDC)。 三、用培养扩增的供者imDC预处理受者，复制大鼠SBT模型，术后观察受者一般情况及移植肠存活时间，检测移植术后移植肠的排斥反应分级。 方法 实验分三部分。 一、SBT部分：将60只Wistar大鼠作为受体随机分为实验组(30只)和对照组(30只)，另取60只Wistar大鼠作供体，行Wistar大鼠同系小肠移植。实验组受体鼠给予三袖套血管吻合法，对照组受体鼠给予经典血管吻合法，比较两组手术结果。 二、imDC培养部分：采用直接分离诱生法：在经典分离诱导方案(GM-CSF+IL-4)的基础上，培养第5天分成两组：IL-4组和IL-10组。IL-4组继续用经典方案培养，IL-10组加入IL-10抑制大鼠骨髓来源DC的成熟，制备imDC，光镜观察DC形态，用FCM检测所得DC表型。 直接分离诱生法：低渗裂解红细胞，特异T、B细胞单抗、补体依赖的细胞毒性作用破坏T、B淋巴细胞、巨噬细胞、血小板等其它杂项细胞，最后阴性选择留下DC及前体细胞，再利用DC的弱粘附性，将DC及前体从血液或骨髓液中分离出来，然后加入细胞因子培养扩增。 三、imDC干预SBT部分：将24只SD大鼠作为受体随机分为空白对照组、CsA组、imDC组、CsA+imDC组，每组6只，另取24只Wistar大鼠作供体。空白对照组只行SBT，不作干预(预处理)；imDC组用培养的Wistar大鼠的imDC预处理SD大鼠，CsA组用CsA预处理SD大鼠，imDC+CsA组用CsA预处理SD大鼠，行同种异体SBT移植，术后观察受体鼠一般情况及移植肠存活时间，术后第3、5、7天分别取移植小肠粘膜行组织病理检查。 结果 一、SBT部分： 1。实验组30例手术，成功27例，失败3例，手术成功率为90%，并发症3例;受体动脉静吻合时间8士2分钟，移植肠温缺血时间10士Zmin，受体手术时间60士10分钟，总手术时间120士ZOmin。 对照组30例手术，成功24例，失败6例，手术成功率为80%，并发症8例;受体动脉静吻合时间38士5分钟，移植肠温缺血时间22士smin，受体手术时间100士15分钟，总手术时间170士3Omin。 2.和对照组比较，实验组动静脉吻合时间、移植肠温缺血时间及受体手术时间比较有显著性差异(P<0.01)。 3.两组手术成功率、并发症发生率、术后体重变化无显著性差异 (P>0 .05)。 二、imDC培养部分: 1.DC的生长情况和形态:DC在第5天出现毛刺状细胞，随着培养时间的延长，此类细胞数量增多，至第13天，I L4组细胞形态均一、毛刺状聚集成簇;IL10组毛刺状细胞和聚集体不明显。 2.DC的纯度、表型:IL一4组DC表面表达大鼠特异性标志OX62的细胞比例为81.30%，MHC一11(oX6)表达水平为63.0%;ILlo组DC表面0X62的细胞比例为78.30%，0X6表达水平为30.03%。 两组OX62表达水平比较无显著性差异(P>0.05)，说明IL10不影响DC的分化;两组MHC一Il(0X6)表达水平比较有非常显著性差异(P<0.01)，说明IL一10可抑制DC的成熟。 三、imDC干预SBT部分: 1动物存活与一般状况空白对照组大鼠均于6一7天间死亡，死于排斥反应，平均存活时间为(6.83士1.17)天。CsA组大鼠移植肠平均存活时间为(13.17士1.17)天，imDC组大鼠移植肠平均存活时间为(2 0.50士3.02)天，csA+i mDC组大鼠移植肠平均存活时间为(26.17士2.14)天，各组间移植肠存活时间比较均有非常显著性差异(P<0.01)。 2移植肠的肉眼所见在切取移植肠时，观察到空白对照组术后第3天移植肠的肉眼观同imDC组，术后第5天，移植肠略苍白，肌张力减弱，肠腔扩大，有纤维素样粘连。术后第7天，移植肠严重粘连成包块状，移植肠苍白，无肌张力，肠腔进一步扩大，肠壁菲薄，内有大量脓性、干酪样物质，移植肠系膜淋巴结肿大.CsA组、imDC组、imDC+CsA组移植肠肠系膜 一5-血管搏动明显，移植肠红润，有肌张力，肠腔内有少量或无肠液分泌，术后第10天仅有少量的纤维素样粘连。 3病理学检查空白对照组大鼠术后第3天移植肠的病理改变符合轻度排斥的诊断标准，第5天符合中度排斥的诊断标准，第7天符合重度排斥的诊断标准。CsA组、imDC组、imDC+CsA组大鼠术后第3天移植肠的病理改变为:肠粘膜绒毛轻度畸形，间质轻度水肿及少量炎细胞浸润，绒毛中轴乳糜管扩张，无排斥征象。第5、7天有部分移植肠病理符合轻度排斥诊断标准，术后第10天的病理表现较第7天有所改善。 结论 一、三袖套法血管吻合法行大鼠异位SBT操作简便、并发症少，受体动静脉吻合时间、移植肠温缺血时间及受体手术时间明显缩短，是一种良好的研究SBT的实验模型。 二、直接分离诱生法可以从大鼠骨髓中可以获得大量较高纯度imDC。直接分离部分可以从大鼠骨髓中分离出纯度较高的DC及其前体，细胞因子GM一CSF、IL一4可体外诱生imDC并扩增，IL一10可有效抑制imDC成熟。 三、imDC免疫大鼠可诱导免疫耐受、减