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目的 胰腺癌为高度恶性肿瘤，由于进展快，发现晚，手术切除率低等原因，人们目前不断探索其它途径治疗胰腺癌。近20年，雌激素与胰腺肿瘤发生之间的关系引起了学者的关注。一系列的研究表明雌激素受体不仅在乳腺、子宫、卵巢、前列腺等激素靶器官的肿瘤中高表达，而且也在胰腺、肝脏、胃等激素效应器官中高表达。大量试验证明它与胰腺肿瘤生物学行为的相关性。 Bcl-2基因是Tsujimoto等1985年在人类滤泡性淋巴瘤t断裂点发现的，是一种原癌基因，抑制细胞凋亡，促进肿瘤的发生发展，其表达的蛋白为Bcl-2蛋白。Bax为Bcl-2的同源蛋白，现已证实是促进凋亡的激动蛋白。近几年研究表明：Bcl-2基因及其产物不仅存在于B及T淋巴细胞中，也存在于其它多种细胞。在正常胰腺组织中Bcl-2蛋白主要表达在胰腺导管上皮细胞，而这些细胞正是胰腺癌主要起源细胞，并大量试验证明Bcl-2与胰腺癌的相关性。 雌激素与胰腺癌的发生相关，Bcl-2与胰腺癌的发生亦相关，那么雌激素与Bcl-2之间是否存在一定的相关性，在调节胰腺癌的发生发展中是否存在相关性，目前尚不清楚。本文旨在通过抗雌激素药物三苯氧胺作用雌激素受体高表达的胰腺癌Bxpc-3细胞，证明三苯氧胺具有抑制胰腺癌细胞生长的作用，并且可能是通过调控Bcl-2／Bax的平衡，诱导细胞凋亡而达到抗胰腺癌的作用，并进一步阐明雌激素与Bcl-2在胰腺癌发生发展中存在一定的相关性。 材料与方法 二．细胞培养：将BXpC－3细胞培养于含10％胎牛血清的RPMll640培养液中，37t，11％湿度，5％CO。孵育箱内。 2．Mrt法分析TAM对细胞增殖的抑制作用 接种于96孔板上的细胞，加人不同浓度TAM，分别培养3在、9天，加人10ulMThO 人孵育4 ／J’时后，加人200ul二甲基亚砚，溶解甲级沉淀，震荡30分钟后，用酶标仪540urn测吸光度值，计算细胞生长抑制率。 3．流式细胞仪检测细胞凋亡 将 10‘个贴壁细胞加人浓度为 10一moVL的 TAM，分别作用24／8J2上44小时后，胰酶消化，用4T预冷的PBS吹打成单细胞悬液，离心去上清，－20t预冷的 70％乙醇4℃固定48小时。2000转离心 10分钟弃上清。2000pL PBS重悬10mg／mlR－Nase20pL，混匀37℃水浴45分钟。PBS洗去RNase，100pLPBS重悬加 100uLPI染液4℃避光染色里小时。FAC Scan流式细胞仪测定荧光强度，激发波长488urn，Cellquest分析软件进行细胞周期DNA含量分析，测亚Q期的凋亡率。重复4次，计算平均值。 4．兔疫组化检测B丑、BCI－2 BxPC上细胞贴壁于载玻片上，加人培养液培养 24 ／J＼时，加入不同浓度的TAM，对照组给予无水乙醇，作用72小时。待作用时间已到，制备标本，标本采用SP法免疫组化染色，胞浆为深棕黄色为阳性细胞。各组高信镜下不同视野随机观察200个细胞，计算Bcl－2小ax阳性细胞率，重复4次染色，计算均值。 5．数据处理 数值采用均数上标准差，用 t检验数据结果。用SPSS 10．0软件分析数据。 ·2· 结 果 1．M’IT检测结果 通过MTI’检测TAM对BXpC－3细胞株作用后，该细胞的生长明显受到抑制。绘制生长抑制率曲线测得3斤s天的IC50值分别为（5．03。0．08）x 10－‘moVL、（2．18。0．04）x 10－‘moVL。（．82 to．09）X 10－‘mo＊L。本研究表明 TAM对 BXpC－3细胞的体外增殖有抑制作用，且呈时间、浓度依赖性。 2．流式细胞仪检测结果 经TAM作用后，用碘化丙陡染色，流式细胞仪检测凋亡率随着药物作用时间的增加而增加。各药物作用组与对照组相比，经过 t检验，差异有显著性河＜0．of人 而且不同时间组间的比较，差异也有显著性河＜0．05人说明 TAM可诱导 BXPC－3细胞凋亡，而且呈时间依赖性。 3．免疫组化检测结果 在经过TAM作用72 ／J＼时后，用细胞免疫组化法检测BXPC－3细胞表达Bax蛋白的阳性率随着药物浓度的增加而明显升高，而表达化一二蛋白的阳性率则随着药物作用浓度的增加而降低。经过t检验，与对照组相比，差异有显著性沙＜0．of人说明TAM抑制胰腺癌Bxpc－3细胞生长，有可能是通过调控Bcl－2瓜ax蛋白表达的平衡实现的。 ·3· 结 论 胰腺癌有h一二高表达的物质基础，且ER与饥一2之间存在一定相关性，结合本实验结果可认为TAM具有抗胰腺癌的作用，并可能是通过化一2诱导胰腺癌细胞凋亡而抑制胰腺癌细胞生长。可为临床上应用TAM治疗胰腺癌提供理论依据。