采用飞行质谱技术筛选结核性胸膜炎患者胸水生物标志物的研究

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目的:(1)明确SELDI在胸水蛋白质研究中所需的最佳蛋白浓度。(2)发现TP的标志性蛋白质,为筛选特异、敏感的且能够方便应用于TP诊断的指标提供新的研究思路;(3)初步构建TP诊断模型。方法:(1)收集16例LCPM患者、22例TP患者PE,用双缩脲法检测所有样本的蛋白浓度;取最高蛋白浓度70.0μg/μl,在总体积一致的前提下加入不同体积的样本量和缓冲液调整至不同的浓度而后将不同浓度的样品加样到芯片;(2)依据最佳蛋白浓度对38例PE标本处理后将不同的样品加样到芯片;(3)利用SELDI技术对样本进行检测,得到其蛋白质质谱扫描谱;(4)比较不同浓度梯度的蛋白质质谱扫描谱.(5)采用Ciphergen Biosystems软件3.2.0版本进行波谱分析,寻找LCPM与TP的差异蛋白质,并初步构建诊断模型。结果:(1)胸水蛋白浓度在600μg/390μl建立的蛋白质指纹图谱蛋白峰较其他浓度明显多,以此做为研究胸水的最佳蛋白浓度。(2)两组中的38个样本的蛋白指纹图谱分析后在分子量2000-8000Da范围内到147个蛋白峰,其中14个在LCPM组和TP组差异有显著意义(P<0.05)。其中10个标志分子在TP组高表达,4个标志分子低表达。利用其中9个差异蛋白不同质荷比的蛋白的数据,可得到一个模型,故该模型准确率89.47%(34/38),灵敏性95.45%(21/22),特异性为81.25%(13/16);盲法验证准确率78.95% (30/38),灵敏性86.36%(19/22),特异性68.75% (11/16)。结论:1、SELDI在胸水蛋白质研究中,在分子量2 500 - 15 000Da范围内所需最佳蛋白浓度为600μg/390μl。2、LCPM组和TP组PE有14个蛋白峰差异显著。
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