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目的: 随着新型非甾体类抗炎药在临床的广泛应用,其生殖毒性越来越引起人们的广泛关注。本实验旨在探讨非甾体类抗炎药帕瑞昔布钠对大鼠离体精子运动、获能和顶体反应的影响,并对其机制进行研究。 方法: 1.成年雄性SD大鼠24只,用颈椎脱臼法处死,取其附睾精子,分离纯化后制成精子悬液。 2.用Western Blot方法检测COX-2蛋白在精子上的表达。 3.分组情况如下:对照组(C),帕瑞昔布钠100uM组(P100),500uM组(P500),1000uM组(P1000),每组重复6次。 4.在37℃孵箱中分别暴露于不同浓度的帕瑞昔布钠5h。 5.采用计算机辅助精子分析系统(CASA)对精子的运动功能进行评价,包括精子运动活力[(a+b)%],平均速度(VAP)、直线速度(VSL)、曲线速度(VCL)和侧摆幅度(ALH)。 6.采用金霉素(CTC)荧光染色法评价精子获能,其中“F”型为未获能精子,“B”型为获能精子,“AR”型为顶体反应精子。以[(B+AR)%]表示已发生获能的精子。 7.经过5h培养已经充分获能的精子标本,加入100uM帕瑞昔布钠1h,采用考马斯亮蓝法评价帕瑞昔布钠对精子顶体反应的影响。 8.用ELISA方法检测精子和培养基中PGE2,PGF2a的变化。 结果: 1.COX-2在大鼠精子上存在表达。 2.与对照组相比,P100、P500、P1000组精子运动活力[(a+b)%]、平均速度(VAP)、直线速度(VSL)、曲线速度(VCL)和侧摆幅度(ALH)呈剂量依赖性的显著降低(P<0.05)。 3.P100、P500、P1000组精子获能程度比对照组明显降低(P<0.05),抑制程度随加入浓度增加而增高。 4.P100组顶体反应与对照组无显著性差异。 5.P100组精子获能培养5h后,精子中PGE2,PGF2a浓度降低,培养基中PGE2,PGF2a浓度升高。 结论: 大鼠精子上存在COX-2蛋白的表达;在急性暴露的条件下,帕瑞昔布钠抑制SD大鼠精子运动功能和体外获能,且随着暴露浓度的增加,抑制作用增强;而对顶体反应没有影响;帕瑞昔布钠可以降低精子获能过程中PGE2,PGF2a的含量。此发现对指导有生育要求的男性患者的临床用药有一定意义。