模拟高原缺氧环境对家兔慢性牙周炎龈下菌群种类分布的影响

来源 :第三军医大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:realord111
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目的慢性牙周炎(chronic periodontitis)是由牙菌斑中的微生物所引起的牙周支持组织的慢性感染性疾病,是成年人丧失牙齿的主要原因。在高原环境下,牙周炎的患病率显著高于其他地区,高达70.2%。牙周微生物是牙周炎发生的始动因子,目前证实的与牙周炎发生有关的可疑致病菌有十余种,不同病因不同类型的牙周炎其主要牙周可疑致病菌种类也不尽相同。高原低氧环境下的牙周炎患者长期在低氧条件下生存,其机体的免疫功能,龈沟液中细胞因子的水平、pH值和O2分压与平原相比均有较大改变,在全身因素的改变和局部微环境的调控下,牙周菌斑微生物的种类、构成、甚至其毒力因子不可避免的受到了影响。目前有关高原环境和平原环境牙周致病菌是否有差异还少见报道。综上所述,本研究模拟高原缺氧环境,构建兔牙周炎动物模型,研究其龈下菌斑中的主要牙周致病菌与平原组的差异。从微生物角度探讨高原低氧环境与牙周炎发生、发展的关系。材料与方法1.研究对象选取清洁级家兔40只完全随机分成4组:平原实验组、平原对照组、高原实验组、高原对照组各10只,实验组采用正畸结扎丝结扎双下颌前牙,并给予高糖饮食;高原组置于模拟海拔5000m的低压氧舱,每天缺氧23小时,持续饲养8周,8周后提取龈下菌斑。2.牙周临床指标检查检查并记录兔双下颌前牙的探诊深度、龈沟出血指数、附着丧失、松动度。3.样本采集取样位点隔湿后,去除龈上菌斑,用无菌刮匙器从牙周袋最底部刮取龈下菌斑,置予无菌EP管中,-70℃保存。4.致病菌的检测按照细菌基因组DNA提取试剂盒说明书提取龈下菌斑和标准菌株基因组DNA,用PCR扩增细菌16S rDNA片段方法检测标本中6种牙周炎致病菌包括牙龈卟啉单胞菌(Porhyromonas gingivalis,Pg)、福赛斯坦纳菌(Bacterides forsythus,Bf)、伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)、中间普氏菌(Prevotellaintermedia,Pi)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)和齿垢密螺旋体(Treponemadenticola,Td)的检出率,2%琼脂糖凝胶电泳检测结果。5.实验8周后采用空气栓塞法处死各组实验动物,采用HE染色观察牙周组织病理学变化。6.统计学分析采用SPSS13.0统计软件,等级资料牙龈指数、牙菌斑指数采用秩和检验,计量资料探诊深度以X±s表示,组间比较采用方差分析。显著水平:P<0.05时有显著差异。结果1.高原实验组家兔体重呈持续下降趋势,8周时牙龈红肿,质地松软,牙周袋形成,牙龈出血指数、菌斑指数和牙周袋深度与平原实验组相比均有显著统计学差异(P<0.05)。HE染色结果示高原实验组牙槽骨出现活跃的破骨细胞性骨吸收陷窝,牙槽嵴顶及固有牙槽骨吸收、破坏。2.牙周可疑致病菌Pg、Bf、Aa、Pi、Fn、Td在高原实验组和平原实验组都可检出,其中Fn、Pi的检出率在高原实验组和平原实验组中有显著差异(P<0.05)。3.在模拟海拔5000米低氧条件下,牙周炎动物模型龈下菌斑致病菌检测中,高原实验组Fn的检出率高于平原实验组,P<0.05;平原实验组Pi的检出率高于高原实验组,P<0.05。结论1.成功建立了缺氧条件下牙周炎动物模型,牙周组织病理变化表现为典型的活动期牙周炎的病理特征,且炎症反应程度重、炎症进展快。2.与平原实验组相比,高原实验组其牙周可疑致病菌的种类发生了改变,高原低氧环境可能影响某些牙周可疑致病菌在牙周袋内的定植。3.高原低氧环境是牙周炎加重的主要原因,Fn与高原牙周炎病变程度加重有一定关系。
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