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为解决交联酶聚集体(Cross-linked enzyme aggregates, CLEAs)酶活低的问题,基于CLEAs的缺点和纳米粒子的特点,本研究将纳米Ti02、纳米MgO、纳米Ni纳米Cu、纳米Fe304分别引入假丝酵母脂肪酶(.Candida sp.1619) CLEAs制备过程中,获得相应的纳米粒子-CLEA(分别记为NTiO2-CLEAs、 NMgO-CLEAs、 NNi-CLEAs、 NCu-CLEAs、 NFe3O4-CLEAs),通过红外光谱分析仪、扫描电子显微镜、荧光光谱仪等手段,分析不同纳米粒子对CLEAs活性、形态结构、性能等的影响,对活性较高的NTiO2-CLEAs,优化了其制备条件,并考察了NTiO2-CLEAs处理模拟含油废水的效果,具体结果如下：(1)与未加纳米粒子的对照CLEAs相比,纳米TiO2的加入明显提高了CLEAs的酶活,最大增加15.2%。而纳米MgO、纳米Ni、纳米Cu、纳米Fe3O4对CLEAs酶活则有抑制作用,最大分别下降92.6%、54.6%、97.7%、63.3%。优化了NTiO2-CLEAs的制备条件,当纳米TiO2在脂肪酶液中浓度为1mg/ml,以5倍酶液体积的丙酮作为沉淀剂,交联剂浓度为2.08%,交联2h,离心速度为6000r/min时,制备的NTiO2-CLEAs酶活最高。(2)纳米粒子-CLEAs形态结构分析表明,与未添加纳米粒子的对照CLEAs相比,NTiO2-CLEAs粒径变小,粒度较均匀,孔道增加；而NMgO-CLEAs、 NNi-CLEAs、 NCu-CLEAs、 NFe3O4-CLEAs出现粒度不均匀性增加、粒径范围扩大、孔道减少的现象。傅里叶红外测试结果表明,NTiO2-CLEAs的红外光谱与对照CLEAs相似,而其他几种纳米-CLEAs的红外光谱变化较大。荧光光谱分析表明,与对照CLEAs相比,纳米TiO2对CLEAs的内源荧光光谱与三位荧光光谱影响均最大。(3) NTiO2-CLEAs的性能测试表明,其热稳定性与pH稳定性均比对照CLEAs好,但储存稳定性与重复使用性略差。NTiO2-CLEAs酶反应动力学常数Km比对照CLEAs减小24.8%,Vmax提高56.7%,表明NTiO2-CLEAs与底物反应亲和力增强,反应速率增加。(4)模拟橄榄油废水处理实验表明,在反应温度为37℃C,橄榄油的体积为lml,油水体积比为1：9,加酶量为23.3mg,反应12h的最佳条件下,对照CLEAs的转化率为78.9%,而NTiO2-CLEAs的转化率为95.1%。模拟大豆油废水处理实验表明,当反应12h时NTiO2-CLEAs大豆油水解率比CLEAs高18.9%,在Na、 Ca无机盐干扰下NTiO2-CLEAs的耐受性比CLEAs高。可以看出,添加适当浓度和种类的纳米粒子可提高CLEAs的活性,改善其性能,但具体的影响机制还需今后做深入研究。