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本研究在总结前人的基础上,以葡3-3稀释液(葡萄糖-柠檬酸盐-卵黄)为基础,最新添加富含PUFA的深海鱼油和VE作为冷冻绵羊精液的新型添加剂,并通过检测一系列指标,进而研究PUFA对绵羊精子冷冻-解冻优良的保护作用,以及对绵羊冷冻精液受胎率的影响。主要是通过在多塞特绵羊精液冷冻稀释液中添加不同比例VE和多不饱和脂肪酸(PUFA),以及不同配比,经过冷冻-解冻过程后,测定解冻后活率和顶体完整率等常规指标,以及精清中钙离子浓度、钠离子浓度、氯离子浓度、LDH酶(乳酸脱氢酶)活力和GOT酶(谷-草转氨酶)活力等理化指标;同时经过筛选,确定5种配方并用透射电子显微镜检测其解冻后精子与鲜精超微结构的比较研究。研究结果表明:1.绵羊精液冷冻稀释液中添加1%VE(V/V),同时添加3%PUFA的处理组,经冷冻-解冻对精子的损害较小,解冻后各项指标均有所改善,活率和顶体完整率分别比对照组显著提高6%和10%(P<0.05),精清中LDH酶(乳酸脱氢酶)活力和GOT酶(谷-草转氨酶)活力比对照组显著降低65%和15%(P<0.05);2.本研究只添加PUFA处理组0.5%、1%、2%、3%、5%解冻后活率和顶体完整率显著高于对照组(P<0.05);同时,随添加PUFA浓度提高(0.5～3%),解冻后活率和顶体完整率有升高的趋势;但均相对低于稀释液中添加1%VE(V/V)组;3.绵羊精液冷冻稀释液中添加1%V(EV/V),同时在两步法稀释时均添加3%PUFA处理组,解冻后活率(0.345)和顶体完整率(0.396)显著高于其他处理组(P<0.05),精清中LDH酶(乳酸脱氢酶)活力(1007.29U/L)和GOT酶(谷-草转氨酶)活力(0.0396卡门氏单位)显著低于其他处理组(P<0.05);4.绵羊精液冷冻稀释液中添加3%VE(V/V),同时在两步法稀释时均添加3%PUFA处理组,解冻后活率(0.328)和顶体完整率(0.335)显著高于对照组和其他处理组,精清中LDH酶(乳酸脱氢酶)活力(681.352 U/L)和GOT酶(谷-草转氨酶)活力(0.046卡门氏单位)显著低于对照组(P<0.05);5.通过电镜可观察到稀释液中加入1%VE和两步稀释液中均添加3%PUFA处理组、稀释液中加入0%VE和两步稀释液中均添加2%PUFA处理组及稀释液中加入3%VE和两步稀释液中均添加3%PUFA处理组类似于鲜精的效果,说明冷冻精子的膜和顶体受到保护。6.经过本研究初步确定绵羊精液冷冻稀释液中添加3%VE(V/V)、两步稀释液中均添加PUFA3%的处理组为最佳配合比例。