目的:探讨肝细胞癌中血管生成拟态的形成情况、内皮依赖性血管生成的核心分子VEGF、上皮-间充质转化的主要参与分子Twist-1、E-cadherin、Vimentin、Eph A2以及血管生成拟态发生过程中的枢纽分子VE-cadherin的表达与肝细胞癌患者临床预后及临床病理资料参数的相关性,筛选出影响临床预后的主要因素,为肝细胞癌患者的预后评估及治疗提供新思路。方法:回顾性分析湖南省人民医院2012年10月01日至2013年12月31日就诊的132例行肝细胞癌外科根治性手术患者的临床病理资料及定期随访资料。首先,将纳入研究的132例肝细胞癌患者癌组织的石蜡标本(实验组)及癌旁肝组织石蜡标本(对照组)进行连续切片,按切片顺序,第一张采用免疫组织化学染色标记CD34并套染PAS特殊染色观察VM的存在情况。继续按切片顺序行免疫组织化学染色检测VE-Cadherin、VEGF、Eph A2、Twist1、E-cadherin、Vimentin的表达情况。分析上述分子表达强度在实验组及对照组中的差异,以及各个分子的表达与VM形成的相关性,进一步分析实验组中VM的形成与患者性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、Edmondson分级、HBV感染、门脉癌栓及肝硬化等临床病理参数之间的关系。统计分析不同临床病理资料、VM的形成以及VE-Cadherin、VEGF、Eph A2、Twist1、E-cadherin、Vimentin的表达情况与肝细胞癌患者总体生存率的关系。最后使用TCGA数据库,在基因m RNA水平验证本次研究中筛选出的VM相关分子与肝细胞癌预后的关系。结果:(1)通过CD34和PAS套染发现肝细胞癌石蜡切片中有44例(44/132,33.3%)病例存在VM结构。(2)VE-Cadherin、VEGF、Eph A2、Twist1在癌组织中表达的阳性率均高于癌旁组织(实验组阳性率依次为:68.2%、51.5%、56.8%、57.6%,对照组阳性率依次为:19.7%、11.4%、25%、21.2%),E-cadherin在癌组织中的表达率低于癌旁组织(实验组阳性率:48.5%,对照组阳性率:65.9%),且具有统计学意义(P<0.05),Vimentin在肿瘤细胞及正常肝细胞中未见明确表达。(3)进行VM与临床、病理资料(性别、年龄、有无肝硬化、肿块的大小、Edmondson分级、TNM分期、有无门脉癌栓、HBV感染)的比较分析,发现TNM分期III+IV期、有门脉癌栓的患者比I+II期、无门脉癌栓的患者VM阳性率高,以上两组差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)肝细胞癌中Twist1及VEGF阳性表达与VM的存在呈正相关。(5)不同TNM分期、Edmondson分级、是否表达Twist1和VEGF、有无门脉癌栓及VM的患者生存时间差异具有统计学意义(P<0.05),进一步行多因素分析发现VM、Twist1、Edmondson分级是影响肝细胞癌生存时间的独立危险因素。(6)本次研究中筛选出的VM相关分子与肝细胞癌预后的关系同TCGA数据库分析结果相符。结论:(1)VM、VE-Cadherin、VEGF、Eph A2、Twist1、E-cadherin可能参与了肝细胞癌的发生、发展。(2)VM在中晚期肝细胞癌患者中发生率较高,可能有利于血道转移,促进门静脉癌栓形成。(3)血管生成中的核心分子VEGF及EMT中的主要分子Twist1,与VM的形成具有密切关系。(4)TNM分期、Edmondson分级、门脉癌栓、是否表达Twist1、VEGF及VM是患者生存时间的影响因素,且VM的存在、Twist1表达的上调、Edmondson III-IV级是肝细胞癌患者不良预后的独立危险因素。