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目的:对比不同进展类型SIV感染中国恒河猴T淋巴细胞免疫活化水平,线粒体抗病毒蛋白水平,探索长期不进展型SIV感染猴的内在病理机制。通过对不同进展类型SIV感染中国恒河猴的SIVmac239反复攻毒,探索长期不进展型感染猴免疫活化水平的稳定性,以及反复感染对正常进展型和长期不进展型SIV感染猴的影响。通过观察青蒿琥酯对SIV感染中国恒河猴免疫活化水平的干预作用,从调节免疫异常激活的角度寻找中医药干预艾滋病的治疗策略。方法:1.不同进展类型SIV感染中国恒河猴模型免疫特征对比研究:将17只中国恒河猴按照是否感染,感染后血浆病毒载量,以及感染后存活时间,分为健康对照(healthy control,HC)组;典型进展(typical progressor,TP)组;长期不进展(viremiccontrollor,VC)组;精英控制(elite controllor,EC)组。检测免疫活化调节相关指标,两周后重复检测以验证相关指标的稳定性。2.中国恒河猴SIV重复攻毒研究:SIV感染中国恒河猴8只,其中正常进展型4只,精英控制型4只。4只正常进展型恒河猴随机分为攻毒组和对照组,每组2只;4只精英控制型恒河猴随机分为攻毒组和对对照组,每组2只。攻毒组在第0周、第4周和第8周以5MID100(5倍100%感染剂量)静脉注射SIVmac239病毒悬液1 mL。3.青蒿琥酯对SIV感染中国恒河猴模型干预研究:健康中国恒河猴8只,复制艾滋模型,待进展到平台期,分为2组,青蒿琥酯治疗组4只,生理盐水对照组4只。青蒿琥酯连续给药8周,分别于给药前,给药后2周、4周、6周、8周,停药后4周、8周检测免疫活化调节相关指标。结果:1.不同进展类型SIV感染中国恒河猴模型免疫特征对比研究结果TP组病毒载量为典型的潜伏期水平,平均值为lg 5.25 copies/ml。VC组较TP组低(P<0.05),平均值为lg4.02 copies/ml。EC组病毒载量长期处于测不出的水平,即小于50copies/ul。HC组、TP组和EC组白细胞计数相近,VC组高于其他三组。HC组CD4细胞比例最高,三个感染组之间未见明显差异,都略低于HC组。CD4计数是TP组最低,略低于其他三组。CD8细胞比例四组恒河猴未见明显差异。HC组CD4/CD8比值高于其他三个感染组,TP、VC和EC组CD4/CD8比值无差异。四个组中,TP单核细胞比例平均数最高,其次是VC组和EC组,HC组最低。单核细胞计数是VC组最高,其次是TP组和EC组,HC组最低。HC组恒河猴CD4细胞表面CD69表达水平维持在较低水平,其他三组感染猴都有不同程度的升高。TP组CD69水平最高,明显高于其他三个组,与HC组之间差异最大(P<0.01),而VC组和EC组低于TP组,但是高于HC组。四组恒河猴CD4细胞表面CD25表达水平的相对情况与CD69类似,TP组最高(与HC组比较P<0.01),VC组次之(与HC组比较P<0.05)。HC猴CD8细胞的CD69表达水平较低,而另外三组恒河猴则有所升高。CD8细胞CD25表达水平与CD69情况相似,HC组水平较低而其他三组都略有升高,TP组升高最明显。TP型恒河猴和VC型恒河猴CD4细胞的CD38表达水平高于HC猴。EC型恒河猴CD38表达水平低于TP组(P<0.01)和VC组(P<0.01)。EC组CD4细胞HLA-DR表达与TP组(P<0.05)和VC组(P<0.05)差异显著。EC组CD38表达比例低于HC猴,平均值在10%以下,但是两组差异无统计学显著性。EC组CD8细胞CD38表水平TP组(P<0.01)和VC组(P<0.05)差异显著。EC组CD8细胞表达HLA-DR表达与TP组(P<0.01)和VC组(P<0.01)比较有统计学差异。三个感染组恒河猴CD4细胞PD-1表达水平相近,HC组略高于三个感染组。CD8细胞的PD-1表达水平也是三个感染组水平相似,但是相较HC组有所下降,且下降幅度大于CD4细胞结果。组间比较在统计学上无显著性。三个感染组SIV特异性CD8细胞比值都有所下降,其中EC组下降最少,其次是VC组。TP猴SIV特异性CD8比值下降最严重,与HC猴差异显著(P<0.01)。EC组明显高于TP组(P<0.01)。SIV特异性CD8细胞绝对值,TP组低于HC组,而VC组和EC组则高于HC组,其中EC组最高,但统计学上无显著性。SIV特异性CD8细胞的PD-1表达水平,VC和EC两个长期不进展组与HC在同一水平,TP组均数高于其他三组。SIV感染中国恒河猴CD8细胞CD38表达水平和HLA-DR表达水平均与SIV特异性CD8细胞比值成反比。VC和EC两个长期不进展组Treg比值与HC组基本一致,而TP显著高于另外三个组,差异有统计学意义。Treg绝对数在四组恒河猴中未见明显差异,TP组均值略高于其他三组。在全部17只恒河猴中,Treg的Ki67表达率显著高于非Treg CD4细胞,前者中位数大约是后者的12倍。在全部4组恒河猴的CD4细胞中,CTLA-4在Treg上的表达率明显高于在非Treg细胞上的表达比例。VC和EC两个长期不进展组相比HC组和TP组,CTLA-4表达水平都有下调,TP和VC、EC组之间差异显著(P<0.05)。CTLA-4在非Treg上的表达水平,TP高于其他三组。2.中国恒河猴SIV重复感染实验研究正常进展型恒河猴TP-A在第一次攻毒后出现乏力、畏寒、消瘦,在第22天死亡,尸体行系统解剖,未见明显异常。其余恒河猴未见明显症状。精英控制猴EC-A病毒载量无变化,EC-B在第三次攻毒后上升至可测水平,但水平保持在3以下,维持至少8周,在第三次攻毒后16周之前恢复至测不出水平。TP-A猴在第一次攻毒后白细胞明显下降,第2周达到最低点,第3周有所回升。TP-B猴在第二次攻毒后白细胞有所上升,持续3周后恢复到实验前水平。实验第16周后有所下降。EC-A和EC-B在重复攻毒后白细胞出现反复波动,最高水平达12×103/μl,最低低至12×103/μl,第三次攻毒4周后趋于稳定。TP-B猴在二次攻毒后淋巴细胞比值波动增大,第三次攻毒后缓慢上升。EC-A和EC-B在第一次和第三次攻毒后淋巴细胞比值有所波动,波动结束后数值高于实验前。TP-B猴纯真CD4细胞比值在第一次攻毒后波动较大,第二次和第三次攻毒后波动明显减小,但数值都略低于攻毒前。TP-A猴在第一次攻毒后CD4细胞增殖水平上升,2周后下降。TP-B猴纯真CD4细胞在第一次和第二次攻毒后低于反复攻毒前水平。TP-B纯真CD8细胞在第二次攻毒后明显低于实验前。TP-A猴在第一次攻毒后Treg比值大幅上升。TP-A猴Treg细胞CTLA-4表达水平在第一次攻毒后迅上升,2周后达到最高点后开始下降。TP-A猴在第一次攻毒后CD4细胞CD38表达水平迅速大幅上升,第3周达到实验前大约3倍水平,而TP-B猴在每次攻毒后出现下降。TP-A猴CD4细胞HLA-DR表达水平在第一次攻毒后持续上升,直至第3周。TP-B猴CD8细胞CD38表达水平在第二次攻毒1周后大幅上升,随后维持在较高水平维持相对波动。TP-A猴在第一次攻毒后CD8细胞HLA-DR表达水平迅速大幅下降直至第3周。3.青蒿琥酯治疗SIV感染中国恒河猴模型的实验研究给药8周内,白细胞计数从第4周开始下降,第6周降至最低点后开始回升。停药后白细胞继续上升,停药4周回升至下降前水平。给药第6周淋巴细胞比例上升至最高点,明显高于对照组(P<0.05),随后下降。给药8周内,治疗组嗜中性粒细胞比例从第4周开始出现下降,至第6周明显低于对照组(P<0.05),后缓慢回升。给药组CD8细胞比例和计数在停药后较对照组低,其中停药4周和8周CD8比例的差异有统计学意义(P<0.05)。在给药4周,给药组CD8细胞的CD69表达水平明显低于对照组(P<0.05)。给药后,治疗组CD8细胞HLA-DR和CD38表达水平开始下降,到第4周两者都明显低于对照组(P<0.05)。该两项指标从第6周开始回升,两组差异消失。给药2周后HLA-DR+CD8细胞计数下降百分比明显大于对照组(P<0.01),停药4周和8周下降百分比也大于对照组(P<0.05)。给药第2周和停药第4周,CD38+CD8细胞计数下降百分比都大于对照组(P<0.05)。给药后4周,CD8细胞CD107a表达下降。结论:结论一:长期不进展型较正常进展型有更完善的CD8细胞功能。CD4/CD8比值不能评价SIV感染中国恒河猴的病程进展类型。长期不进展型SIV感染中国恒河猴CD4 T淋巴细胞和调节性T细胞活化明显低于正常进展猴,其中精英控制型恒河猴CD8 T淋巴细胞活化明显低于正常进展猴。CD8细胞异常激活水平越高,对SIV具有杀伤性的细胞比例就越低。存在除了抗病毒免疫以外的其他抑制淋巴细胞异常激活的机制。结论二:精英型SIV感染中国恒河猴淋巴细胞免疫水平的稳定性较典型进展型恒河猴强。重复攻毒可抑制TP猴CD4细胞和CD8细胞更新,加速TP猴病情进展,可使EC型恒河猴病毒量一过性上升。。结论三:青蒿琥酯可改善SIV感染中国恒河猴细胞毒性T细胞免疫异常激活。青蒿琥酯治疗中出现的嗜中性粒细胞下降是可逆的。