xCELLigence免标记技术用于β-细胞和T细胞的功能研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:whitejet
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本论文围绕探索基于阻抗的免标记检测方法在研究胰岛β-细胞损伤及T细胞活化方面的应用展开。该免标记检测方法涉及的仪器xCELLigence系统由罗氏诊断和艾森生物联合开发。  大量的研究表明,胰岛β-细胞的损伤在1型和2型糖尿病的发病及发展中充当重要角色。在论文第一部分的研究中,我们利用四种常见的胰岛β-细胞损伤诱导剂分别在两株胰岛瘤细胞株INS-1E和MIN6中建立了8种损伤模型。不同浓度的损伤剂处理细胞后可剂量依赖性地导致细胞指数(Cellindex,CI)下降,且CI曲线的形状不但和损伤诱导剂的种类有关,也同细胞的种类相关。通过将同一时间点的CI值和细胞计数试剂盒-8(Cellcountingkit-8,CCK-8)的检测结果进行比较,我们确定了xCELLigence系统在研究胰岛β细胞损伤方面的适用性、可靠性和准确性。此外,我们还运用xCELLigence系统进一步研究胰高血糖素样肽-1(Glucagon-likepeptide-1,GLP-1)受体天然激动剂GLP-1及小分子非肽类激动剂Boc5对胰岛β-细胞的保护作用。实验结果显示,GLP-1和Boc5在部分模型中可以一定程度地缓解诱导剂引发的β-细胞损伤。与此平行进行的CCK-8和形态学检测的结果同xCELLigence所得出的结论一致,由此证实xCELLigence系统适用于进行β-细胞功能的研究,并再次验证Boc5是GLP-1受体的完全激动剂。  T细胞在发挥正常免疫功能中具有重要的作用。当人体受到外来病原体入侵时,T细胞会被特异性地激活并分泌各种细胞因子,参与针对外来抗原的特异性免疫反应将其清除。因此,针对外源性抗原的特异性T细胞的活化有利于健康,而针对自身抗原的T细胞的过度活化将导致严重的自身免疫疾病,如桥本氏甲状腺炎、1型糖尿病、类风湿性关节炎和多发性硬化症等。因此,可以高效检测T细胞活性的方法无论在临床诊断或免疫抑制剂的研发中都显得尤为重要。本论文以xCELLigence系统为检测平台,利用抗CD28和CD3的功能性抗体成功地建立了8种T细胞活化模型,并选取信号较高、变异系数较小的模型结合抑制剂PP2及BAPTA-AM对检测信号的特异性开展了研究,同时平行地辅之以白细胞介素-2(Interluekin-2,IL-2)mRNA含量的测定。实验结果表明,xCELLigence系统可用来观察T细胞的活化状态。采用形态学手段发现T细胞被激活后微丝的重构是引起xCELLigence系统记录的CI值迅速上升的重要因素。
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