帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是一种中老年人群中常见的神经变性疾病；它以黑质致密部多巴胺能神经元进行性缺失、纹状体多巴胺水平降低为主要特点，给老年人及其家庭带来很大痛苦。其临床特征主要表现为静止性震颤、肌肉僵直、运动迟缓、姿势不稳。PD的病因多种且发病机制尚不完全明确。6-羟多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）是神经递质多巴胺的羟基化衍生物，于1959年首先被Senoh等人成功分离，能高选择地引起交感神经肾上腺素能神经末梢急性溃变，在1968年，Ungerstedt研究显示,向黑质致密部注射6-OHDA能够导致黑质纹状体的多巴胺系统顺行性变性，从而生成第一个制备帕金森病的动物模型。本课题利用6-OHDA定向定量注射SD大鼠左脑纹状体诱导帕金森病模型。龙胆苦苷(Gentiopicroside)是龙胆和秦艽的有效成分之一，具有抗炎、镇痛、保肝、利胆、健胃、抗氧化等广泛的生物学活性，本课题组前期研究发现其能抑制MPP+诱导SH-SY5Y细胞IκBα降解，抑制NF-κB炎症信号通路的激活，降低通路相关产物tm TNF-α、IL-1β、iNOS的表达水平，降低由炎症刺激细胞MMP-9的表达水平，表明龙胆苦苷在以神经炎症为靶点，对PD的预防和治疗可能具有一定的潜在价值。但其在帕金森病动物模型上的神经保护作用未见报道。建立从秦艽中提取龙胆苦苷的提取工艺；建立6-OHDA诱导帕金森病模型的行为学评价体系，为药物治疗该疾病提供科学评价方法；初步探讨龙胆苦苷对6-OHDA诱导帕金森病模型的神经保护作用，为PD神经变性的防治和新药研发提供可靠的实验依据。本课题首先应用SP70大孔树脂和硅胶提纯法从秦艽水提物中分离提纯龙胆苦苷；通过向左侧脑纹状体注射定量6-OHDA溶液建立体内诱导损伤PD模型，3周后通过腹腔注射阿扑吗啡(0.5mg/kg)观察已造模大鼠向健侧旋转情况来确定造模是否成功（≥7r/min即视为造模成功），分别应用转棒和旷场分析测定动物的运动功能，应用肌电测试实验测定大鼠的震颤幅度；行为学评价组大鼠进行行为学评价与分析，建立行为学评价体系；治疗组大鼠连续给药2周后再次检测上述行为学并分析各剂量组药效，同时与给药前数据比较；通过免疫组化方法检测大鼠脑部左侧黑质中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)减少情况，探讨龙胆苦苷的神经保护作用。从秦艽中提取龙胆苦苷，实验方法较以往提取工艺创新可行，提取物更加纯化，杂质较少，HPLC检测更接近龙胆苦苷标准品；6-OHDA定量注射左脑纹状体造模后，腹腔注射给予阿扑吗啡诱导旋转圈数明显升高，说明造模成功；转棒实验中部分大鼠在棒时间显著缩短，旷场实验中横向跨格次数减少，出现运动功能障碍；肌电检测结果显示部分大鼠肌肉震颤频率和幅度均增加。对行为学数据分析得出帕金森病分类：震颤型、运动障碍型和混合型；6-OHDA定量注射左脑纹状体造模后，腹腔注射给予阿扑吗啡诱导旋转圈数明显升高，说明造模成功；与假手术组相比，转棒实验中大鼠在棒时间明显减少，旷场实验中大鼠活动减少，肌电实验中大鼠出现不自主震颤，且振幅增大，显著性差异；连续给药2周后，龙胆苦苷各剂量组与阳性药组均有所改善，但大剂量组改善显著，30min内旋转圈数明显少于模型组，在棒时间延长，活动增加，不自主震颤的振幅减小，与模型组相比有显著差异；龙胆苦苷高剂量组和阳性药组可明显提高TH免疫阳性神经元的数目，改善TH阳性细胞状态。从秦艽中提取龙胆苦苷，实验方法较以往提取工艺创新可行，提取物更加纯化，杂质较少；帕金森病行为学体系的建立能够对帕金森病更好的分型，这对某些药物针对帕金森病不同的发病症状和种类治疗效果不佳加以解释并归类，以期对该病的对症治疗有所助益；龙胆苦苷各剂量组对帕金森病的运动障碍、肌肉疲劳度和不自主震颤有所改善，其中大剂量组的改善作用明显，且尤其对振幅改善显著，说明龙胆苦苷可能对帕金森病不自主震颤疗效优于其他行为学，有可能是治疗震颤型帕金森病的潜在药物之一。龙胆苦苷明显增加TH阳性细胞数目提示其可以改善帕金森病多巴胺数目的减少。