目的:Notch信号通路是细胞内保守信号转导途径,对胚胎发育和维持多细胞生物稳态具有重要的作用。研究表明,在睾丸发育过程中Notch信号通路调节了胎儿睾丸间质祖细胞向胎儿睾丸间质细胞的分化。但关于Notch信号通路在睾丸间质细胞的作用还比较缺乏,因此本文主要研究Notch信号通路对睾丸间质细胞的影响及可能的机制。方法:我们通过逆转录PCR检测小鼠睾丸间质细胞系TM3中Notch家族成员的表达情况,通过免疫组化检测Notch家族成员在小鼠睾丸间质细胞的表达情况。培养TM3细胞,加入Notch信号通路非选择阻断剂MK-0752,通过CCK8、流式细胞和原位凋亡检测细胞的增殖和凋亡情况;通过荧光定量PCR和Western blot方法检测类固醇激素合成酶表达情况及调控细胞增殖的细胞周期蛋白的表达。为了进一步分析不同Notch受体成员在睾丸间质细胞中的作用,我们分别过表达了Notch1、Notch2和Notch3,分析了他们对细胞增殖及类固醇激素合成酶表达的影响。结果:我们发现Notch信号通路成员Notch1、Notch 2、Notch3、Dll1和Dll4在小鼠睾丸间质细胞中表达。Notch信号通路非选择性阻断剂MK-0752抑制了TM3细胞的增殖,使细胞阻滞在G0/G1期。机理研究发现MK-0752增加了p21^Waf1/Cip1和p27的表达,对c-Myc、CyclinD1和CyxlinD2没有影响。为了进一步探清哪条Notch信号通路介导了TM3细胞的增殖,我们分别转染了Notch1、Notch2和Notch3过表达质粒,我们发现Notch1促进了TM3细胞增殖,抑制p21^Waf1/Cip1和p27的表达。Notch2和Notch3对细胞增殖和p21^Waf1/Cip1和p27的表达没有明显影响。另外,我们也检测了Notch信号通路对TM3类固醇激素合成酶的影响。Notch信号通路抑制剂MK-0752处理后,大大减少了TM3细胞相关类固醇激素合成酶P450scc和3β-HSD表达。过表达了Notch2促进了P450scc表达。结论:1、Notch信号通路抑制剂MK-0752抑制TM3细胞增殖,增强了p21^Waf1/Cip1和p27mRNA和蛋白的表达。2、Notch1信号通路通过影响p21^Waf1/Cip1和p27的mRNA和蛋白的表达,调控了TM3细胞的增殖。而Notch2和Notch3对增殖没有明显的作用。3、Notch信号通路抑制剂MK-0752减少了睾丸间质细胞中类固醇激素合成酶P450scc和3β-HSD表达。其中,Notch2信号通路调节了P450scc表达。