痛泻要方及撤药对D-IBS模型大鼠结肠组织AQP3表达的影响

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目的:观察痛泻要方及撤药后对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)模型大鼠稀便率、稀便级、腹泻指数以及结肠组织中水通道蛋白3(AQP3)表达的影响,为痛泻要方中各药味组成的科学内涵提供实验依据。方法:将60只SPF级Wistar雄性大鼠按随机法分成6组,即对照组、模型组、痛泻要方组、痛泻要方去白术组、痛泻要方去白芍组、痛泻要方去陈皮组,每组10只。适应性饲养一周后,采用应激与束缚相结合的方法复制D-1BS大鼠模型(冷水游泳、夹尾、禁水、禁食、电击、昼夜颠倒)。观察大鼠一般状态的变化,稀便率、稀便级、腹泻指数和结肠黏膜病理学变化对模型进行评价,鉴定模型复制成功。按照人鼠剂量的换算,分别给予成人等效剂量10倍的痛泻要方及其撤药的中药液治疗1次/日,共7天。采集标本后,用免疫组化方法检测各组大鼠结肠组织AQP3蛋白的表达,应用RT-PCR方法检测各组大鼠结肠组织AQP3mRNA的表达。数据采用SPSS13.0软件进行分析。结果:1.一般状态观察造模结束后与对照组比较,模型组动物均出现毛色干枯、精神萎靡、形体消瘦、蜷缩倦怠、大便稀软、肛门部多有粪便附着等。与模型组比较,痛泻要方组一般状态明显好转,毛色光泽,双眼有神,体重增加,活动灵敏,大便成形,腹泻已经完全治愈;去白术组和玄白芍组腹泻状态无明显改变;去陈皮组一般状态稍有好转,毛色光泽,体重稍增,大便有型但仍稀软。大鼠结肠组织病理学显示:各组大鼠结肠组织结构正常。2.稀便率与对照组比较,模型组稀便率显著增高:与模型组比较,痛泻要方组衡便率显著降低(P<0.01);去白术组、去白芍组无显著差异(P>0.05):去陈皮组稀便率降低(P<0.05)。3.稀便级与对照组比较,模型组稀便级显著增高:与模型组比较.痛泻要方组衡便级显著降低(P<0.01);去白术组、去白芍组无显著差异(P>0.05);上陈皮组衡便组降低(P<0.05)。4.腹泻指数对照组腹泻指数为0.00±0.00:与模型组比较,痛泻要方组腹泻指数显著下降:去白术组、去白芍组无明显差异(P>0.05);去陈皮组腹泻指数降低(P<0.05)。5.免疫组化法检测显示:与对照组比较,模型组结肠组织黏膜层中AQP3蛋白表达明显下调(P<0.01);与模型组比较,痛泻要方组结肠组织黏膜层中AQP3蛋白表达显著上调(P<0.01);去白术组和去白芍组无显著性差异(P>0.05);去陈皮组结肠组织黏膜层中AQP3蛋白表达上调(P<O.01)。6.以β-actin作为内参,与对照组比较.模型组结肠组织黏膜层中AQP3mRNA表达下调(P<0.01);与模型组比较,痛写要方组结肠组织黏膜层中AQP3mRNA表达显著上调(P<0.01);去白术组和去白芍组结肠组织黏膜层中AQP3mRNA表达均无显著性差异(P>0.05);去陈皮组结肠组织黏膜层中AQP3mRNA表达上调(P<0.01)。结论:1.痛泻要方原方以及去掉佐药陈皮能够明显降低D-IBS模型大鼠稀便率和稀便级、腹泻指数;而去掉君药白术组和臣药去白芍组则无明显作用2.痛泻要方组和去陈皮组能够明显上调结肠组织AQP3蛋白表达,而去掉君药白术或去掉臣药白芍对AQP3表达无明显影响。3.痛泻要方组和去陈皮组能够明显地上调结肠组织AQP3mRNA的表达,而去掉君药白术或去掉臣药白芍对AQP3mRNA表达无明显影响。
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